豬徒手克隆技術的優(yōu)化及Tet1在早期胚胎發(fā)育中的變化.pdf

1、隨著生物技術的不斷發(fā)展，體細胞克隆作為一種技術手段已經被廣泛應用于轉基因動物、物種保護、家畜繁育、異種器官移植以及疾病模型的研究，但是克隆效率低下一直阻礙這一技術發(fā)展。一般認為克隆效率低下與重構胚不正確或者不完全的重組而導致的錯誤表觀修飾相關，其中最主要的就是DNA甲基化異常和組蛋白修飾錯誤。因此如何提高克隆效率對推動這一技術發(fā)展有著重要的意義。
　　1.徒手克隆技術的優(yōu)化
　　為提高徒手克隆效率，我們在徒手克隆過程中對克隆

2、胚重構以及胚胎移植都進行了優(yōu)化。結果發(fā)現(xiàn)優(yōu)化后的囊胚率能達到40％左右，并將235枚桑椹胚及囊胚移植到3頭自然發(fā)情后4到5天的受體母豬子宮角內，并使兩頭受體母豬成功懷孕，雖然1頭母豬中途不幸流產，但另1頭母豬在妊娠后第114天自然分娩產下8只小豬，相對與其他實驗室的克隆產子率明顯提高。
　　2.卵母細胞成熟過程及孤雌激活后胚胎發(fā)育中Tet1的免疫熒光染色
　　實驗選取成熟0h(GV)、12h、24h、36h和MⅡ時期脫完卵丘

3、的卵母細胞以及孤雌激活（物理+化學）后7.5h.12h、15h、24h和2-cell(36h)胚胎用PFA固定后進行免疫熒光染色。結果發(fā)現(xiàn)在卵母細胞成熟過程中及PA后胚胎早期發(fā)育過程中，Tet1在不同階段出現(xiàn)不同的表達。結果表明Tet1可能在卵母細胞成熟過程及孤雌激活后胚胎發(fā)育中起著調控作用，但有待進一步研究。
　　3.5-aza-CdR對卵母細胞成熟過程中和胎兒成纖維細胞甲基化相關基因表達的影響
　　實驗對成熟培養(yǎng)的卵母細