含cry1Ab和cry2Ab雙基因的抗蟲轉(zhuǎn)基因水稻的研究.pdf

1、蘇云金桿菌(Bacillus thuringiensis，簡稱Bt)是一類非常重要的殺蟲微生物，它能產(chǎn)生殺蟲結(jié)晶蛋白，對農(nóng)業(yè)上的許多有害昆蟲有特異性的毒殺作用。近三十年來，以蘇云金桿菌殺蟲蛋白為基礎(chǔ)的轉(zhuǎn)基因植物已在世界范圍內(nèi)商業(yè)化，用于防治重要經(jīng)濟作物的害蟲。隨著抗蟲轉(zhuǎn)基因植物的廣泛應(yīng)用，使得害蟲連續(xù)暴露在Bt毒蛋白的選擇壓力下，害蟲對Bt殺蟲蛋白質(zhì)抗性的發(fā)生不可避免。部分害蟲已經(jīng)產(chǎn)生了Bt抗性，影響了Bt轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物的功效。同時使用兩

2、個以上殺蟲機理有差別的Bt毒蛋白基因轉(zhuǎn)化植物，可以防止或延緩害蟲抗性的發(fā)生，同時也可以擴大轉(zhuǎn)基因植物的抗蟲譜和抗蟲效果。Cry1Ab蛋白與Cry2Ab蛋白的氨基酸序列同源性非常低，研究表明它們不易產(chǎn)生交互抗性。因此本論文構(gòu)建了同時包括抗蟲基因cry1ab表達框、抗蟲基因cry2Ab表達框和草甘膦抗性基因1174表達框的T-DNA轉(zhuǎn)化載體1300-cry1Ab-cry2Ab-1174。以攜帶該載體的農(nóng)桿菌LBA4404侵染粳稻“秀水110

3、”，獲得了雙抗蟲基因同時抗草甘膦的轉(zhuǎn)基因水稻。
　　 對獲得的轉(zhuǎn)基因水稻進行PCR鑒定和Southern雜交試驗，結(jié)果顯示，抗蟲基因已成功地轉(zhuǎn)入到水稻中；Western Blot分析表明抗蟲基因cry1Ab、cry2Ab和草甘膦抗性基因1174均在轉(zhuǎn)基因水稻葉片中成功獲得表達。利用棉鈴蟲和稻縱卷葉螟對轉(zhuǎn)基因水稻進行抗蟲生物測定，結(jié)果顯示該轉(zhuǎn)基因水稻具有良好的抗蟲性能；通過噴施20mM/L的草甘膦，發(fā)現(xiàn)該轉(zhuǎn)基因水稻對草甘膦具有很好