建鯉BMP15、BMP2B基因克隆及其表達(dá)分析.pdf

1、建鯉，作為我國(guó)最主要的鯉魚(yú)養(yǎng)殖品種之一，因其肉質(zhì)肉味好，飼料轉(zhuǎn)化率高，性溫順，易馴養(yǎng)、易起捕，適應(yīng)性和抗病力強(qiáng)，能自繁自育，遺傳性狀穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，備受消費(fèi)者、養(yǎng)殖戶的青睞。但為具有肌間刺對(duì)其深加工造成了影響，從而影響了其經(jīng)濟(jì)價(jià)值。BMP基因與骨質(zhì)形成發(fā)生有關(guān)，在修復(fù)骨質(zhì)缺損和促進(jìn)骨折愈合等發(fā)揮重要作用，但對(duì)魚(yú)類肌間刺的形成、發(fā)生機(jī)制、分布等是否有作用還不清楚。因此，本文以建鯉為研究對(duì)象，利用RT-PCR和實(shí)時(shí)熒光定量PCR等技術(shù)，探討B(tài)M

2、P家族中的B MP15和BMP2B基因在建鯉腦、心臟、脾臟、肝臟、卵巢、鰓、腸和肌肉8個(gè)組織的mRNA水平的表達(dá)，尋求BMP15、BMP2B基因與魚(yú)類肌間刺的關(guān)系。
　　 主要研究結(jié)果如下:
　　 1、克隆了BMP15基因的全長(zhǎng)cDNA序列，BMP2B基因的部分片段序列，分別為1727bp和948bp，預(yù)測(cè)氨基酸序列，分別編碼359和266個(gè)氨基酸。氨基酸序列與Genebank中其它物種的該基因的氨基酸同源性均較高。

3、r>　　 2、對(duì)獲得的BMP15基因編碼的氨基酸序列分析發(fā)現(xiàn):這段氨基酸序列含有TGF-β結(jié)構(gòu)域;該蛋白疏水性最大值為2.711;蛋白質(zhì)跨膜結(jié)構(gòu)分析顯示，含有一個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域;蛋白信號(hào)肽預(yù)測(cè)，存在一個(gè)信號(hào)肽切割位點(diǎn);對(duì)二級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測(cè)，結(jié)果二級(jí)結(jié)構(gòu)組成中，無(wú)規(guī)則卷曲(coil)占比例最大，達(dá)65.74％，α-螺旋(Alpha-Helix)為21.70％，β-折疊(Beta-Strand)最少為13.09％;
　　 BMP15蛋白

4、質(zhì)最大可能位于線粒體;有14個(gè)Ser，6個(gè)Thr，3個(gè)Tyr，可能成為蛋白激酶磷酸化的位點(diǎn);對(duì)糖基化位點(diǎn)進(jìn)行分析，結(jié)果存在一個(gè)N-糖基化位點(diǎn)，而無(wú)O-糖基化位點(diǎn)。
　　 對(duì)獲得的BMP2B基因編碼的氨基酸序列分析發(fā)現(xiàn):這段氨基酸序列含有兩個(gè)低組成復(fù)雜性結(jié)構(gòu)域和一個(gè)TGF-β結(jié)構(gòu)域;該蛋白疏水性最大值為1.689;蛋白質(zhì)跨膜結(jié)構(gòu)分析顯示，不存在跨膜結(jié)構(gòu)域;蛋白信號(hào)肽預(yù)測(cè)，存在一個(gè)信號(hào)肽切割位點(diǎn);對(duì)二級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測(cè)，結(jié)果二級(jí)結(jié)構(gòu)組成

5、中，無(wú)規(guī)則卷曲(coil)占比例最大，達(dá)60.90％，β-折疊(Beta-Strand)為30.45％，α-螺旋(Alpha-Helix)最少為8.65％; BMP2B蛋白質(zhì)最大可能位于細(xì)胞質(zhì);有7個(gè)Ser，0個(gè)Thr，3個(gè)Tyr，可能成為蛋白激酶磷酸化的位點(diǎn);對(duì)糖基化位點(diǎn)進(jìn)行分析，結(jié)果存在一個(gè)N-糖基化位點(diǎn)，而無(wú)O-糖基化位點(diǎn)。
　　 3、系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析顯示:建鯉BMP15首先跟異育銀鯽BMP15聚在一起，然后跟斑馬魚(yú)、歐洲海

6、鱸BMP15聚在一起，而哺乳動(dòng)物BMP15也明顯的聚在一起，然后共同聚在一起，可以看出建鯉BMP15首先跟幾個(gè)鯉科魚(yú)類BMP15聚在一起，說(shuō)明親緣關(guān)系是較近的。
　　 建鯉BMP2B首先跟同屬于鯉科的斑馬魚(yú)BMP2B聚在一起，也說(shuō)明跟斑馬魚(yú)的親緣關(guān)系是最近的。各個(gè)物種的魚(yú)類BMP2B聚在一起，而哺乳動(dòng)物BMP2B也明顯的聚在一起，明顯的分為兩大枝。
　　 4、實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示:建鯉BMP15基因在8個(gè)組織中都有

7、表達(dá)，但表達(dá)水平不一樣。在卵巢中表達(dá)量最高，在肝臟、肌肉中其次，呈中度表達(dá)，再次是腸、腦和鰓，在心臟和脾臟中的表達(dá)量最低;BMP2B基因也在8個(gè)組織中均有表達(dá)，但表達(dá)水平不一樣。在肌肉中的表達(dá)量最高，在卵巢、肝臟中其次，呈中度表達(dá)，再次是脾臟、鰓和腸，在心臟和腦中的表達(dá)量最低。
　　 本文運(yùn)用RT-PCR和RACE技術(shù)，首次成功克隆了建鯉BMP15和BMP2B基因，并對(duì)其作了組織表達(dá)譜分析，為進(jìn)一步研究BMP15和BMP2B基因