豬BMP-15和BMPR1B基因的克隆和LHβ亞基基因的SSCP分析.pdf

1、中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文豬BMP-15和BMPR1B基因的克隆和LHβ亞基基因的SSCP分析姓名：王愛華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：動(dòng)物遺傳育種與繁殖指導(dǎo)教師：吳常信;李寧2002.6.1。圳I i 壅! ! 查堂墮! ：型壅：! 堡苧 一——A B S T R A C TP C R —S S C Pa n a l y s i sw a sc o n d u c t e do nt h ew h o l en e c l e o t i d

2、 es e q u e n c eo f p o r c i n eL H Bg e n e e x c e p tt h eu p s t r e a mr e g u l a t i o nr e g i o n N o p o l y m o r p h i c s i t ew a s f o u n d i nt h e3e x o n sa n d3 ’r e g u l a t i o nr e g i o n B u t

3、t h e r ew e r e2p o l y m o r p l f i cs i t e si nt h e 1 3 6 7s i t eo fi n t r o n I a n d1 8 2 3s i t eo f i n t r o n2 D e r e c t i o no f t h em u t a t i o n si n E r h u a l i a n ，Y o r k s h i r e ．D u r o ca

4、 n dL a n d r a c ep i g s‘s h o w e dt h a tt h ea l l e l e so f t h e2s i n g l en u c l e o t i d ep o l y m o r p h i s m s ( S N P s ) w e r eb r e e ds p e c i f i cT h e r e s u l t so f l e a s ts q u a r ea n a

5、 l y s i si n d i c a t e dn os i g n i f i c a n ti n f l u e n c eo f t h e g e n o t y p e s o f t h e2。S N P so nt h et r a i t so f l i t t e rs i z e ．A sf o rr e l a t i o n s h i pb e t w e e nt h eh a p l o t y

6、p e sa n dr e p r o d u c t i v et r a i t s ．t h e Pv a l u e so f d i f r e r e n c eb e t w e e nA A C D a n dA B C D ，b e t w e e nA A C D a n dA A D D ，b e t w e e nA A C D a n d A A C C o nt h en u m b e rb o r na

7、l i v et r a i tw e r ea p p r o x i m a t l yr e a c h i n gt ot h et h r e s h o l d v a l u er P = O ，0 9 6 7 ) ，T h eB M P - 1 5 g e n es e q u e n c ew a s c l o n e db yP C R i np i g ．T h eD N A s e q u e n c ew a

8、 s6 3 3 7 b pi n l e n g t h ．P r e d i c t o no f t h eb i n d i n gs i t e o ft r a n s f a c t o rf o u n da b u n d a n th e a ts h o c kr e s p o n s ee l e m e n t si nt h es e q u e n c e ．A l i g n m e n to f t h

9、 eB M P 一1 5g e n e so f p i g ，h u m a n ，s h e e ps h o w e d t h a tt h e r ew a s8 2 ％n u c l e o t i d ei d e n t i t yb e t w e e np i ga n dh u m a n ，w h i l e9 0 ％i d e n t i t yb e t w e e np i ga n ds h e e p

10、．T h ep r e d i c t e d3 9 4a m i n oa c i d s e q u e n c eo fp o r c i n eB M P 一1 5p r o t e i nw a s8 73 ％i d e n t i c a lw i t hs h e e pB M P 一1 5p r o t e i n ．a(chǎn) n d7 2 ．9 ％i d e n t i c a lw i t hh u m a n B M P

11、 ．1 5p r o t e i n T h em a t u r ep e p t i d ec o d e db yp i gB M P 一1 5g e n es h a r e dt h eu n i q u ef e a t u r ew i t ht h a to f h u m a n a n ds h e e p ，a sc l e a v a g e a t t h ep r e d i c t e dR X X R p

12、 r o t e o l y t i cp r o c e s s i n gs i t e p r o d u c e d1 2 5 a m i n oa c i d sp e p t i d ew h i c hc o n t a i n e d6 c y s t e i n e r e s i d u e s A l lt h e s er e s u l t s i n d i c a t e dt h er e l a t i

13、 v e l yh i g hc o n s e r v a t i o no f B M P 一1 5g e n e a m o n g d i f f e r e n ts p e c i e sP C R —S S C Pa n a l y s i sw a sc o n d u c t e do nt h e p a r t i a l n u c l e o t i d es e q u e n c eo f p i g B

14、M P 一1 5g e n e T h er e s u l t ss h o w e d t h a tt h es e q u e n c eo ft h e5 ’r e g u l a t i o nr e g i o n ，e x o n 1 ，p a r t i a l i n t r o na n dp a r t i a le x o n2p r e c e d et h er e g i o nc o d i n gm

15、a t u r ep e p t i d ew e r ei d e n t i c a la m o n g L a n d r a c e ，Y o r k s h i r ea n dE r h u a l i a np i gb r e e d s ．B u t 3p o l y m o r p h i c s i t e sw e r e f o u n d i n t h em a t u r ep e p t i d ec

16、 o d i n gr e g i o n T w o A —÷Gt r a n s i t i o n sa tn u c l e o t i d ep o s i t i o n5 9a n d151 o f t h em a t u r ep e p t i d es u b s t i t u t e dg l u t a m i ca c i d ( E ) w i t hg l y c i n e ( G ) a

17、tr e s i d u e2 0a n da s p a r a g i n e s ( N ) w i t ha s p a r 【i ca c i d ( D ) a tr e s i d u e51 r e s p e c t i v e l y ，w h i l e t h eC _ T t r a n s i t i o n a t n u c l e o t i d ep o s i t i o n 1 0 6r e s

18、u l t e di nn o c h a n g e st ot h ea m i n oa c i ds u b s t i t u t i o n ．D e t e c t i o no f t h e3 p o l y m o r p h i c s i t e si nL a n d r a c e ，Y o r k s h i r e ，D u r o ca n dE r h u a l i a np i g sc o n

19、f i r m e d t h ef a v o r a b l eg e n o t y p eo f w i l dt y p e( A A ) i n a l lt h e s e p i gp o p u l a t i o n s ．T h ea s s o c i a t i o n o f t h ea l l e l e so f t h e 3p o l y m o r p h i c s i t e sw i t h

20、p i g l i t t e r s i z e a n dn u m b e rb o ma l i v e w a se v a l u a t e d b y l e a s t s q u a r e a n a l y s i s ．T h er e s u l t ss h o w e dn os i g n i f i c a n td i f f e r e n c eo f a l lt h eg e n o t y

21、 p e sf o rt h el i t t e rs i z et r a i t A s f o rt h en u m b e rb o r na l i v et r a i t ，t h ep i g w i t hA A g e n o t y p e ( t h el e a s ts q u a r ev a l u e = l 1 0 5 ) p r o d u c e dm o r e l i v ep i g l

22、 e t st h a nt h a tw i t hA B g e n o t y p e ( h e t e r o z y g o t e o f t h eA —- G m u t a t i o n a tn u c l e o t i d ep o s i t i o n5 9 ) ( t h e l e a s t s q u a r e v a l u e 2 1 0 ．2 7 ) a n d t h e d i f f

23、 e r e n c e b e t w e e nt h e mw a s a p p r o x i m a t l yr e a c h i n gt ot h et h r e s h o l d v a l u e ( P = 0 0 9 6 7 ) ．T h e c o m p l e t ec o d i n gr e g i o no f p i gB M P R I Bg e n ew a sc l o n e db