抗鹽堿BADH基因轉(zhuǎn)化玉米的研究.pdf

1、土壤的鹽堿脅迫是降低農(nóng)作物產(chǎn)量的主要環(huán)境因素之一。因此,研究和培育耐鹽堿植物,對綜合開發(fā)利用鹽漬土壤、提高農(nóng)作物產(chǎn)量意義重大。玉米產(chǎn)業(yè)在國民經(jīng)濟中占有非常重要的地位,但玉米是對鹽分中度敏感的作物,耐鹽性差。因此,培育耐鹽玉米品種具有重要的意義。B73玉米自交系是一種廣泛應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因研究的受體品種,通過基因工程手段將耐鹽堿基因BADH(Betaine aldehydedehydrogenase,甜菜堿醛脫氫酶)導(dǎo)入B73玉米自交系,培育出

2、耐鹽堿的B73玉米自交系,進而以期與高產(chǎn)玉米品種雜交,從而獲得既耐鹽堿又高產(chǎn)的玉米品種。
　　 本研究利用基因槍轟擊法將克隆自新疆鹽堿灘上生長的異苞濱藜植物的耐鹽堿BADH基因用基轉(zhuǎn)入B73玉米胚性愈傷組織,以bar基因作為篩選標記,利用加入雙丙胺膦的選擇性培養(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)化愈傷,對T0代、T1代植株進行分子檢測和抗性檢測,獲得了具有耐鹽堿特性的轉(zhuǎn)化植株,并得到轉(zhuǎn)BADH基因種子。主要研究結(jié)果如下:
　　 1、構(gòu)建了含有ub

3、i啟動子的p3300-ubi-BADH植物表達載體；
　　 2、確定了B73玉米胚性愈傷組織的雙丙氨磷篩選壓為2mg／L；
　　 3、用基因槍轟擊法對B73玉米胚性愈傷組織進行轉(zhuǎn)化,得到了196塊抗性愈傷,58株再生植株,最終成活19株,有16株為PCR陽性植株,結(jié)實3株；
　　 4、通過對T0代轉(zhuǎn)基因植株進行PCR檢測和Southern Blot分析,初步證實了抗鹽堿BADH基因已整合到玉米基因組中；