蘆薈提取物抑菌抗病毒及免疫增強(qiáng)作用的研究.pdf

1、蘆薈(Aloe vera)屬于多年生百合科常綠草本植物，主產(chǎn)于熱帶和亞熱帶地區(qū)。蘆薈含糖類、蒽醌類物質(zhì)等多種生物活性成分，具有抗菌、抗紫外線輻射、抗病毒、抗氧化、提高人體免疫機(jī)能等功能，并對腫瘤細(xì)胞和艾滋病病毒有抑制作用。目前對于蘆薈應(yīng)用的研究主要集中在保健品、藥品、化妝品等行業(yè)，而在畜牧業(yè)方面的應(yīng)用少有報(bào)導(dǎo)。抗生素自20世紀(jì)90年代初在我國畜禽業(yè)得到了廣泛應(yīng)用，但隨之而來的藥物殘留等問題，嚴(yán)重制約我國畜產(chǎn)品的出口。研發(fā)抗生素替代品等天

2、然綠色的生物制劑成為畜禽業(yè)研究的方向之一。蘆薈作為藥用植物，來源廣泛、價(jià)格低廉、功能多樣、無毒副作用，其多種生物學(xué)成分與抗生素相比具有潛在的應(yīng)用價(jià)值，值得深入研究。鑒于前人相關(guān)的研究，本研究針對引致畜禽疫病的幾種重要細(xì)菌和病毒，研究庫拉索蘆薈粗提物的抑菌、抗病毒效果，為開發(fā)天然綠色生物制品提供試驗(yàn)依據(jù)；同時(shí)選擇蘆薈多糖對家禽免疫禽波氏桿菌疫苗后的免疫增強(qiáng)作用為研究的切入點(diǎn)，選取由SPF胚孵化的健康雛雞為動(dòng)物模型，研究蘆薈多糖的免疫增強(qiáng)作

3、用，為開發(fā)新型免疫增強(qiáng)劑及家禽疫苗佐劑提供試驗(yàn)依據(jù)。本研究分為兩個(gè)部分：
　　 第一部分：蘆薈粗提物抑菌抗病毒作用的研究。為了研究蘆薈粗提物對多種常見畜禽致病菌和病毒的體外抑菌和抗病毒作用，采用培養(yǎng)基打孔法，觀察蘆薈粗提物對致病菌的抑菌作用；用含不同濃度蘆薈粗提物的固體培養(yǎng)基觀察抑菌效果；采用細(xì)菌計(jì)數(shù)法，分析致病菌在蘆薈粗提物液體培養(yǎng)基中的增殖情況。分別采用細(xì)胞培養(yǎng)和雞胚接種法，檢測不同濃度蘆薈粗提物以及不同作用時(shí)間對傳染性囊病

4、病毒(IBDV)和新城疫病毒(NDV)增殖的抑制作用。結(jié)果表明：蘆薈粗提物對供試菌均具有抑菌作用，其中對金黃色葡萄球菌、四聯(lián)球菌、八疊球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌、蠟樣芽胞桿菌有明顯的抑菌圈，直徑(D)＞14 mm；蘆薈粗提物濃度大于40 ％即可使固體培養(yǎng)基中形成可數(shù)的菌落；濃度大于80 ％的液體培養(yǎng)基中細(xì)菌生長到達(dá)對數(shù)期的時(shí)間比對照組延長至少4 h。IBDV與蘆薈粗提物作用組的OD570nm值均高于病毒對照組，并且隨濃度的增大和時(shí)間的延長

5、而升高；NDV與蘆薈粗提物作用組的血凝價(jià)均低于病毒對照組，并且隨濃度的增大和作用時(shí)間的延長而降低。
　　 第二部分：蘆薈多糖提取及其對禽波氏桿菌滅活苗的免疫增強(qiáng)作用。用優(yōu)化的水提醇沉法提取蘆薈多糖，用細(xì)菌滅活苗的常規(guī)制備方法制備禽波氏桿菌滅活苗。取5日齡SPF雛雞210只，隨機(jī)分為6組，I、II、III、IV、V組分別于頸部皮下注射含有蘆薈多糖40 mg/ml、20 mg/ml、10 mg/ml、蜂膠20 mg/ml、松花粉多糖

6、20 mg/ml的禽波氏桿菌疫苗，VI組只注射禽波氏桿菌疫苗，注射劑量均為1ml/羽份。免疫后每周采取血液、脾臟和小腸，用微量凝集試驗(yàn)檢測血清抗體水平、間接ELISA法檢測膽汁內(nèi)抗體含量、全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀測定外周血淋巴細(xì)胞比率、流式細(xì)胞術(shù)檢測脾臟淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率。結(jié)果表明蘆薈多糖得率為0.72％，純度為82.4％。I、IV、V組血清和膽汁抗體水平、血液淋巴細(xì)胞比率以及脾臟淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率均顯著高于VI組（P＜0.05），免疫后14～28d