半夏再生體系的建立及其次生代謝的調(diào)控.pdf

1、本文以半夏為試材，運(yùn)用現(xiàn)代化技術(shù)組織培養(yǎng)，建立了半夏再生體系，研究了外源物苯丙氨酸(Phe)、天冬氨酸(Asp)、硝普鈉(SNP)、乙酰水楊酸(ASA)的單一或復(fù)合添加對(duì)半夏愈傷組織時(shí)期及苗期總生物堿、鳥苷和腺苷含量的影響，測(cè)定了其體內(nèi)氮代謝關(guān)鍵酶及次生代謝相關(guān)酶活性的變化，初步探討了其次生代謝調(diào)控機(jī)理，為Phe，Asp，SNP，ASA提高半夏體內(nèi)總生物堿、鳥苷和腺苷含量提供理論依據(jù)，為半夏的大面積種植和工業(yè)化生產(chǎn)提供重要方法和手段。<

2、br>　　 主要結(jié)論如下:
　　 1.半夏再生體系的建立。以半夏葉柄、葉片、塊莖做外植體誘導(dǎo)愈傷組織發(fā)現(xiàn)，葉柄誘導(dǎo)效果最好。通過(guò)添加不同激素觀察其對(duì)半夏愈傷組織誘導(dǎo)、增殖、分化的影響，發(fā)現(xiàn)添加有0.5mg/L2，4-D，1.5mg/LKT和1.0mg/LIAA的MS培養(yǎng)基利于半夏愈傷組織發(fā)生;黑暗條件下，MS+2.0mg/L2，4-D+1.0mg/LKT+1.0mg/LIAA時(shí)誘導(dǎo)半夏愈傷組織增殖效果比較好;MS+0.2mg/

3、L2，4-D+1.5mg/L6-BA有利于半夏愈傷組織出芽和生根，且小植株生長(zhǎng)狀態(tài)良好。
　　 2.不同外源添加物對(duì)半夏愈傷組織生長(zhǎng)和總生物堿、鳥苷及腺苷含量的影響。將不同濃度Phe，Asp，SNP，ASA分別添加于半夏愈傷組織培養(yǎng)基中，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，前體物Phe，Asp抑制半夏愈傷組織的生長(zhǎng)，而誘導(dǎo)子SNP和ASA則促進(jìn)其生長(zhǎng);低濃度Phe促進(jìn)半夏愈傷組織中總生物堿的積累，而高濃度則抑制其合成，不同濃度的Asp，SNP，

4、ASA均促進(jìn)其體內(nèi)總生物堿的積累，其中效果最好的四種外源添加物濃度分別為50mg/L，150mg/L，1mg/L，1mg/L;Phe和ASA對(duì)半夏愈傷組織中鳥苷的合成均為低濃度時(shí)促進(jìn)而高濃度時(shí)抑制，不同濃度Asp，SNP則均促進(jìn)其鳥苷的合成，其中濃度分別為50mg/L，150mg/L，0.1mg/L，1mg/L時(shí)誘導(dǎo)效果最好;前體物Phe和Asp有利于半夏愈傷組織中腺苷的合成，濃度分別為50mg/L，25mg/L時(shí)效果最好，但是誘導(dǎo)子S

5、NP和ASA卻抑制腺苷的積累?？梢?jiàn)外源添加物對(duì)半夏愈傷組織生長(zhǎng)和總生物堿、鳥苷及腺苷合成的作用效果與添加物的種類及濃度有關(guān)。
　　 3.適宜濃度的Phe，Asp，SNP，ASA單獨(dú)或兩兩復(fù)合調(diào)控半夏愈傷組織中總生物堿、鳥苷和腺苷合成與其體內(nèi)氮代謝有關(guān)。一方面調(diào)節(jié)體內(nèi)谷氨酸合酶(GOGAT)，谷氨酸脫氫酶(GDH)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)活性，提高GOGAT，GDH等酶活性促進(jìn)體內(nèi)吸收的無(wú)機(jī)氮向有機(jī)氮轉(zhuǎn)化，提高GOT活性促進(jìn)有機(jī)氮谷

6、氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)槠渌被岷铣傻鞍踪|(zhì)和其他含氮類化合物，為總生物堿、鳥苷和腺苷合成提供底物及能量。提高PAL活性，加速苯丙烷類物質(zhì)代謝，促進(jìn)總生物堿的合成。其中當(dāng)1mg/LASA和150mg/LAsp復(fù)合加入時(shí)誘導(dǎo)GOGAT，GDH，GOT，PAL活性提高和可溶性蛋白含量增加效果最好，總生物堿、鳥苷含量增加最顯著。
　　 4.不同濃度SNP噴灑半夏組培苗對(duì)其體內(nèi)總生物堿、鳥苷、腺苷含量的影響。不同濃度SNP均能提高半夏組培苗體內(nèi)GOG