玉米粉對水源性腸球菌抗生素耐藥形成的影響.pdf

1、目的:建立模型生態(tài)系統(tǒng)研究玉米粉引發(fā)水源性腸球菌對氯霉素(CHL)、紅霉素(ERY)、氨芐西林(AMP)、土霉素(OTC)、萬古霉素(VAN)和環(huán)丙沙星(CIP)耐藥表型產(chǎn)生的影響,初步探討玉米粉引發(fā)水源性腸球菌對紅霉素和環(huán)丙沙星耐藥的機理。
　　 方法:從福州森林公園采集土樣,檢測土樣中腸球菌對試驗用6種抗生素的敏感性,結(jié)果表明這些土樣中的腸球菌對這6種抗生素都敏感,可作為模型生態(tài)系統(tǒng)的底泥。模型生態(tài)系統(tǒng)建立后,將系統(tǒng)分為6個

2、劑量組,分別添加8g／L、4g／L、1g／L、0.25g／L、0.05g／L和0g／L的滅菌玉米粉,每個劑量組兩個重復(fù)。采集第0d、第1d、第3d、第7d、第14d、第30d、第40d、第61d和第130d系統(tǒng)中的泥樣,檢測泥樣中腸球菌對6種抗生素的敏感性,了解玉米粉對水源性腸球菌抗生素耐藥表型形成的影響；應(yīng)用PCR方法檢測ermB、mefA、gyrA和Esp等基因,序列測定和分析gyrA基因83位點和87位點是否發(fā)生突變；結(jié)晶紫染色法

3、檢測不同葡萄糖濃度對腸球菌生物膜形成的影響。
　　 結(jié)果:(1)添加不同劑量玉米粉對腸球菌分離率的影響不同,影響程度和添加玉米粉的劑量呈正相關(guān),添加8g／L玉米粉對腸球菌分離率影響最大,可使分離率從40％上升為100％,添加4g／L玉米粉時腸球菌的分離率最高只上升到80％,添加1g／L、0.25g／L、0.05g／L和0g／L玉米粉時腸球菌的分離率變化不大。
　　 (2)添加不同劑量玉米粉沒有引發(fā)腸球菌對氨芐西林和萬古霉

4、素的敏感性產(chǎn)生可檢測到的影響。添加0.05g／L-8g／L玉米粉對環(huán)丙沙星的耐藥性都產(chǎn)生了影響,且添加玉米粉的劑量越大產(chǎn)生的影響越大,環(huán)丙沙星耐藥菌株的出現(xiàn)時間越早,耐藥率也越大。添加8g／L玉米粉可在第1d就出現(xiàn)了耐環(huán)丙沙星的菌株,而在第7d時就使腸球菌對環(huán)丙沙星的耐藥率達到了100％；添加4g／L玉米粉時對環(huán)丙沙星的影響雖然也在第1d就出現(xiàn),但到了第14d時才出現(xiàn)了最高的耐藥率85.7％；添加1g／L玉米粉對環(huán)丙沙星的影響較小,在第

5、7d才出現(xiàn)25％的耐藥率,影響最大時的耐藥率也才達到50％。對氯霉素的影響也因添加玉米粉劑量不同而不同,添加8g／L和4g／L玉米粉時沒有出現(xiàn)對氯霉素耐藥的腸球菌,而添加0.05g／L-1g／L玉米粉時都出現(xiàn)了氯霉素耐藥菌株,且耐藥程度與添加玉米粉的劑量呈正相關(guān),耐藥率分別為20％、25％和55.5％。對紅霉素和土霉素耐藥性的影響情況較一致,耐藥程度與添加玉米粉的劑量不完全呈正比,且耐藥菌株出現(xiàn)的時間較晚。
　　 (3)對紅霉素

6、耐藥的28株腸球菌中,ermB基因的陽性率為78.6％,而對紅霉素敏感的16株腸球菌均未檢測到ermB耐藥基因,另外,無論是對紅霉素敏感的腸球菌還是對紅霉素耐藥的腸球菌均未檢測到mefA耐藥基因。模型生態(tài)系統(tǒng)中分離的102株腸球菌gyrA基因的陽性率為96.1％,但83位點和87位點均沒有發(fā)生突變。
　　 (4)表達腸球菌表面蛋白的Esp基因檢出率為0％。不同濃度的葡萄糖對分離自模型生態(tài)系統(tǒng)中腸球菌的生物膜形成能力有不同的促進作

7、用,1.0％葡萄糖比0.5％葡萄糖有更強的促進生物膜形成作用。
　　 結(jié)論:(1)添加玉米粉可引發(fā)模型生態(tài)系統(tǒng)中的腸球菌對紅霉素、土霉素、環(huán)丙沙星和氯霉素產(chǎn)生耐藥,但對萬古霉素和氨芐西林沒有產(chǎn)生可檢測到的影響。
　　 (2)添加不同劑量的玉米粉引發(fā)水源性腸球菌對紅霉素、土霉素、環(huán)丙沙星和氯霉素耐藥的程度不同；對環(huán)丙沙星的影響程度與添加玉米粉的劑量呈正比,添加劑量越大對環(huán)丙沙星耐藥性形成速度與程度的影響越大；對氯霉素的影響

8、在添加0.05g／L-1g／L劑量區(qū)間,影響程度與添加玉米粉的劑量呈正相關(guān)；對土霉素和紅霉素的影響較不規(guī)律,影響程度與添加玉米粉的劑量不完全呈正比,但整體趨勢還是表現(xiàn)為添加劑量越大,影響程度越大。
　　 (3)模型生態(tài)系統(tǒng)中的腸球菌對環(huán)丙沙星耐藥不是由gyrA基因突變引起,但對紅霉素的耐藥絕大部分與ermB耐藥基因有關(guān)。
　　 (4)腸球菌生物膜的形成與Esp基因之間沒有必然的聯(lián)系,但腸球菌在葡萄糖誘導(dǎo)下具有形成生物膜的