玉米粉對(duì)水源性腸球菌抗生素耐藥形成的影響.pdf

1、目的:建立模型生態(tài)系統(tǒng)研究玉米粉引發(fā)水源性腸球菌對(duì)氯霉素(CHL)、紅霉素(ERY)、氨芐西林(AMP)、土霉素(OTC)、萬古霉素(VAN)和環(huán)丙沙星(CIP)耐藥表型產(chǎn)生的影響,初步探討玉米粉引發(fā)水源性腸球菌對(duì)紅霉素和環(huán)丙沙星耐藥的機(jī)理。
　　 方法:從福州森林公園采集土樣,檢測(cè)土樣中腸球菌對(duì)試驗(yàn)用6種抗生素的敏感性,結(jié)果表明這些土樣中的腸球菌對(duì)這6種抗生素都敏感,可作為模型生態(tài)系統(tǒng)的底泥。模型生態(tài)系統(tǒng)建立后,將系統(tǒng)分為6個(gè)

2、劑量組,分別添加8g／L、4g／L、1g／L、0.25g／L、0.05g／L和0g／L的滅菌玉米粉,每個(gè)劑量組兩個(gè)重復(fù)。采集第0d、第1d、第3d、第7d、第14d、第30d、第40d、第61d和第130d系統(tǒng)中的泥樣,檢測(cè)泥樣中腸球菌對(duì)6種抗生素的敏感性,了解玉米粉對(duì)水源性腸球菌抗生素耐藥表型形成的影響；應(yīng)用PCR方法檢測(cè)ermB、mefA、gyrA和Esp等基因,序列測(cè)定和分析gyrA基因83位點(diǎn)和87位點(diǎn)是否發(fā)生突變；結(jié)晶紫染色法

3、檢測(cè)不同葡萄糖濃度對(duì)腸球菌生物膜形成的影響。
　　 結(jié)果:(1)添加不同劑量玉米粉對(duì)腸球菌分離率的影響不同,影響程度和添加玉米粉的劑量呈正相關(guān),添加8g／L玉米粉對(duì)腸球菌分離率影響最大,可使分離率從40％上升為100％,添加4g／L玉米粉時(shí)腸球菌的分離率最高只上升到80％,添加1g／L、0.25g／L、0.05g／L和0g／L玉米粉時(shí)腸球菌的分離率變化不大。
　　 (2)添加不同劑量玉米粉沒有引發(fā)腸球菌對(duì)氨芐西林和萬古霉

4、素的敏感性產(chǎn)生可檢測(cè)到的影響。添加0.05g／L-8g／L玉米粉對(duì)環(huán)丙沙星的耐藥性都產(chǎn)生了影響,且添加玉米粉的劑量越大產(chǎn)生的影響越大,環(huán)丙沙星耐藥菌株的出現(xiàn)時(shí)間越早,耐藥率也越大。添加8g／L玉米粉可在第1d就出現(xiàn)了耐環(huán)丙沙星的菌株,而在第7d時(shí)就使腸球菌對(duì)環(huán)丙沙星的耐藥率達(dá)到了100％；添加4g／L玉米粉時(shí)對(duì)環(huán)丙沙星的影響雖然也在第1d就出現(xiàn),但到了第14d時(shí)才出現(xiàn)了最高的耐藥率85.7％；添加1g／L玉米粉對(duì)環(huán)丙沙星的影響較小,在第

5、7d才出現(xiàn)25％的耐藥率,影響最大時(shí)的耐藥率也才達(dá)到50％。對(duì)氯霉素的影響也因添加玉米粉劑量不同而不同,添加8g／L和4g／L玉米粉時(shí)沒有出現(xiàn)對(duì)氯霉素耐藥的腸球菌,而添加0.05g／L-1g／L玉米粉時(shí)都出現(xiàn)了氯霉素耐藥菌株,且耐藥程度與添加玉米粉的劑量呈正相關(guān),耐藥率分別為20％、25％和55.5％。對(duì)紅霉素和土霉素耐藥性的影響情況較一致,耐藥程度與添加玉米粉的劑量不完全呈正比,且耐藥菌株出現(xiàn)的時(shí)間較晚。
　　 (3)對(duì)紅霉素

6、耐藥的28株腸球菌中,ermB基因的陽(yáng)性率為78.6％,而對(duì)紅霉素敏感的16株腸球菌均未檢測(cè)到ermB耐藥基因,另外,無論是對(duì)紅霉素敏感的腸球菌還是對(duì)紅霉素耐藥的腸球菌均未檢測(cè)到mefA耐藥基因。模型生態(tài)系統(tǒng)中分離的102株腸球菌gyrA基因的陽(yáng)性率為96.1％,但83位點(diǎn)和87位點(diǎn)均沒有發(fā)生突變。
　　 (4)表達(dá)腸球菌表面蛋白的Esp基因檢出率為0％。不同濃度的葡萄糖對(duì)分離自模型生態(tài)系統(tǒng)中腸球菌的生物膜形成能力有不同的促進(jìn)作

7、用,1.0％葡萄糖比0.5％葡萄糖有更強(qiáng)的促進(jìn)生物膜形成作用。
　　 結(jié)論:(1)添加玉米粉可引發(fā)模型生態(tài)系統(tǒng)中的腸球菌對(duì)紅霉素、土霉素、環(huán)丙沙星和氯霉素產(chǎn)生耐藥,但對(duì)萬古霉素和氨芐西林沒有產(chǎn)生可檢測(cè)到的影響。
　　 (2)添加不同劑量的玉米粉引發(fā)水源性腸球菌對(duì)紅霉素、土霉素、環(huán)丙沙星和氯霉素耐藥的程度不同；對(duì)環(huán)丙沙星的影響程度與添加玉米粉的劑量呈正比,添加劑量越大對(duì)環(huán)丙沙星耐藥性形成速度與程度的影響越大；對(duì)氯霉素的影響

8、在添加0.05g／L-1g／L劑量區(qū)間,影響程度與添加玉米粉的劑量呈正相關(guān)；對(duì)土霉素和紅霉素的影響較不規(guī)律,影響程度與添加玉米粉的劑量不完全呈正比,但整體趨勢(shì)還是表現(xiàn)為添加劑量越大,影響程度越大。
　　 (3)模型生態(tài)系統(tǒng)中的腸球菌對(duì)環(huán)丙沙星耐藥不是由gyrA基因突變引起,但對(duì)紅霉素的耐藥絕大部分與ermB耐藥基因有關(guān)。
　　 (4)腸球菌生物膜的形成與Esp基因之間沒有必然的聯(lián)系,但腸球菌在葡萄糖誘導(dǎo)下具有形成生物膜的