豬鏈球菌對(duì)四環(huán)素類抗生素耐藥性及耐藥基因研究.pdf

1、豬鏈球菌（Streptococcus suis）根據(jù)菌體莢膜抗原特性的不同，分為1~34 型及 1/2 型共35個(gè)血清型。其中1/2、1、2、7、9和14型均可引起豬只發(fā)病，其中以2型流行最廣，對(duì)豬的致病性亦最強(qiáng)。豬鏈球菌病是由多種不同群的鏈球菌引起的豬不同臨床診斷類型傳染病的總稱。可致豬腦膜炎、關(guān)節(jié)炎、肺炎、心內(nèi)膜炎、多發(fā)性漿膜炎和局部膿腫，同時(shí)該病還可導(dǎo)致生豬從業(yè)人員感染和死亡，是一種重要的人畜共患病病原?？咕幬镌陬A(yù)防和治療豬鏈球

2、菌病過程中起著重要的作用，但同時(shí)也產(chǎn)生細(xì)菌耐藥性不斷增強(qiáng)的可怕后果。
　　 四環(huán)素類抗生素是由鏈霉菌產(chǎn)生或經(jīng)半合成制取的一類堿性廣譜抗生素。能抑制革蘭陽(yáng)性菌及陰性菌，衣原體、支原體、立克次體及原蟲等非典型性微生物的生長(zhǎng)。近年來，隨著四環(huán)素類抗生素不合理的應(yīng)用，導(dǎo)致耐藥菌不斷的變異和增加，其耐藥性的出現(xiàn)限制了它們的使用。為解決其耐藥性問題，科研人員正著手進(jìn)行四環(huán)素類抗生素耐藥分子機(jī)制的研究，目前已證實(shí)其分子機(jī)制主要為抗生素外排或核

3、糖體保護(hù)。但是，目前國(guó)內(nèi)外就豬鏈球菌對(duì)四環(huán)素類抗生素的耐藥機(jī)制研究較少，其耐藥機(jī)制主要是由于TetM 和TetO 兩種核糖體保護(hù)蛋白的產(chǎn)生，二者能依賴GTP將四環(huán)素從30S亞基水解下來從而耐藥，且都是可轉(zhuǎn)移因子。
　　 本試驗(yàn)對(duì)從東北三省（黑龍江、遼寧、吉林）豬場(chǎng)采集的豬只鼻腔棉拭子進(jìn)行分離、純化，從中得到12株革蘭陽(yáng)性、鏈狀球菌。通過生化鑒定及蘭氏分群試驗(yàn)，結(jié)果表明12株菌株均為血清D 型，共得到10 種生化反應(yīng)編碼。利用K-

4、B 試驗(yàn)法進(jìn)行豬鏈球菌對(duì)四環(huán)素、氯霉素、慶大霉素、紅霉素、復(fù)方新諾明、環(huán)丙沙星、青霉素G、苯唑青霉素、氨芐青霉素 9種常用抗菌藥物耐藥性試驗(yàn)。結(jié)果表明所用菌株對(duì)9種常用抗菌藥物表現(xiàn)為高度耐藥，并且所有菌株都表現(xiàn)為多重耐藥，耐藥譜在4耐～9耐之間，以8耐菌株最多。以美國(guó)臨床檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)（NCCLS）的臨界濃度做為判斷標(biāo)準(zhǔn)，采用微量稀釋法判定了豬鏈球菌對(duì)強(qiáng)力霉素、鹽酸四環(huán)素、鹽酸金霉素3種四環(huán)素類抗生素的耐藥性。結(jié)果表明豬鏈球菌對(duì)強(qiáng)力霉素

5、、鹽酸四環(huán)素、鹽酸金霉素的耐藥率很高，分別為100％、100％、91.7％，同時(shí)，細(xì)菌對(duì)三種四環(huán)素類抗生素的MIC50 及MIC90均大于64μg/ml，耐藥范圍分別為4~＞64、16~＞64、2~＞64μg/ml。對(duì)12株豬鏈球菌進(jìn)行昆明鼠致病性試驗(yàn)，結(jié)果顯示高致病性的菌株共有6株，中等致病性的菌株共有5株，無致病性的菌株為1株?？傊滤缆蔬_(dá)到91.7％。
　　 本研究利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain rea

6、ction，PCR）方法擴(kuò)增四環(huán)素類抗生素耐藥基因，用以闡明東北三省分離的耐四環(huán)素藥物的豬鏈球菌tetO、tetM基因的檢出率、點(diǎn)突變及氨基酸突變與耐藥的關(guān)系。結(jié)果為tetM基因檢出率為100％、 tetO基因檢出率為0％。證明12株豬鏈球菌耐藥主要是由核糖體保護(hù)蛋白中tetM基因介導(dǎo)，與tetO基因無關(guān)。而有無其他耐藥機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究確定。tetM基因核苷酸序列與Genbank 中同源序列的同源性達(dá)93％~100％。氨基酸位點(diǎn)突