腸桿菌科細菌質粒介導β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥性研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、[目的] 研究腸桿菌科細菌中產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)及質粒介導AmpC酶菌株的分布。 [方法] 收集天津胸科醫(yī)院2004年臨床分離腸桿菌科細菌396株,以K-B法測定細菌對抗生素的敏感性;以NCCLS推薦紙片確證試驗檢測其產(chǎn)ESBLs情況,以頭孢西丁試驗粗篩產(chǎn)AmpC酶菌。以細菌接合試驗輔助耐藥基因的定位。提取質粒DNA作模板,采用聚合酶鏈反應(PCR)和多重PCR方法及序列分析確定ESBLs及質粒介導AmpC酶的

2、基因型 [結果] 396株腸桿菌科細菌對氨芐西林耐藥率高達91.4%,一、二代頭孢菌素耐藥率高于40%,三代頭孢菌素中頭孢噻肟耐藥率達25.70%,慶大霉素耐藥率達26.5%,環(huán)丙沙星耐藥率達23.2%,復方磺胺耐藥率達31.8%,三耐以上的多重耐藥菌株達71.2%。其中產(chǎn)ESBLs菌株檢出率為25.0%(99/396),疑似產(chǎn)AmpC酶菌株檢出率為16.9%(67/396);產(chǎn)ESBLs菌株除對亞胺陪南仍保持較好的敏感性(9

3、9.0%)以外,對其他抗生素耐藥率均高于40%,青霉素類和一、二代頭孢菌素耐藥率均為100%,三代頭孢菌素中頭孢噻肟耐藥性最高,達79.6%。產(chǎn)ESBLs菌株接合試驗陽性率為40.4%(40/99),疑似產(chǎn)AmpC酶菌株接合試驗陽性率為10.4%(7/67),接合子藥敏試驗證實供體菌的耐藥標誌部分或全部傳遞給受體菌;以40株接合試驗陽性的產(chǎn)ESBLs菌株的質粒DNA為模板用PCR方法進行基因分型,結果顯示TEM、SHV、CTX-M陽性率

4、分別為50.0%、20.0%和67.5%,產(chǎn)2種型別ESBLs的菌株達61.3%;對7株接合試驗陽性疑似產(chǎn)AmpC酶菌株提取其質粒DNA為模板,用PCR方法進行基因分型,,結果有4株為DHA型陽性,其中2株菌同時產(chǎn)ESBLs,高度疑似為產(chǎn)超超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(SSBL)菌株。隨機抽取5株ESBLs擴增陽性的PCR產(chǎn)物進行序列分析,其結果證實2株TEM型擴增產(chǎn)物均屬TEM-1型,經(jīng)NCBI基因庫查詢和BLASTn比對,與奇異變形桿菌(AY

5、729027)注冊的相應序列的核苷酸相似性分別為99.76%(835/837)、99.62%(847/851),氨基酸相似性分別為100%、99.62%(259/260);1株SHV型擴增產(chǎn)物屬于SHV-12型,與弗勞地枸櫞酸桿菌(AY826418)注冊的相應序列的核苷酸及氨基酸相似性均為100%;2株CTX-M型擴增產(chǎn)物分屬CTX-M3、CTX-M14型,分別與弗勞地枸櫞酸桿菌(Y10278)、液化沙雷氏菌((AF462398)注冊的

6、相應序列的核苷酸相似性為99.82%(534/536)、99.63(534/536),氨基酸相似性為100%、99.45%(180/181)。 [結論] 腸桿菌科細菌抗生素耐藥性較嚴重,且呈多重耐藥模式;產(chǎn)ESBLs菌及疑似產(chǎn)AmpC酶菌占有重要地位,其耐藥性可通過接合傳遞;ESBLs基因分型以CTX-M型為主,其次為TEM型和SHV型,同時產(chǎn)2種以上酶菌株居多數(shù),并發(fā)現(xiàn)可疑產(chǎn)超超廣譜酶(SSBL)菌株;其中CTX-M14、S

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