腸桿菌科細菌質粒介導β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥性研究.pdf

1、[目的] 研究腸桿菌科細菌中產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)及質粒介導AmpC酶菌株的分布。 [方法] 收集天津胸科醫(yī)院2004年臨床分離腸桿菌科細菌396株，以K-B法測定細菌對抗生素的敏感性；以NCCLS推薦紙片確證試驗檢測其產(chǎn)ESBLs情況，以頭孢西丁試驗粗篩產(chǎn)AmpC酶菌。以細菌接合試驗輔助耐藥基因的定位。提取質粒DNA作模板，采用聚合酶鏈反應(PCR)和多重PCR方法及序列分析確定ESBLs及質粒介導AmpC酶的

2、基因型 [結果] 396株腸桿菌科細菌對氨芐西林耐藥率高達91.4％，一、二代頭孢菌素耐藥率高于40％，三代頭孢菌素中頭孢噻肟耐藥率達25.70％，慶大霉素耐藥率達26.5％，環(huán)丙沙星耐藥率達23.2％，復方磺胺耐藥率達31.8％，三耐以上的多重耐藥菌株達71.2％。其中產(chǎn)ESBLs菌株檢出率為25.0％(99/396)，疑似產(chǎn)AmpC酶菌株檢出率為16.9％(67/396)；產(chǎn)ESBLs菌株除對亞胺陪南仍保持較好的敏感性(9

3、9.0％)以外，對其他抗生素耐藥率均高于40％，青霉素類和一、二代頭孢菌素耐藥率均為100％，三代頭孢菌素中頭孢噻肟耐藥性最高，達79.6％。產(chǎn)ESBLs菌株接合試驗陽性率為40.4％(40/99)，疑似產(chǎn)AmpC酶菌株接合試驗陽性率為10.4％(7/67)，接合子藥敏試驗證實供體菌的耐藥標誌部分或全部傳遞給受體菌；以40株接合試驗陽性的產(chǎn)ESBLs菌株的質粒DNA為模板用PCR方法進行基因分型，結果顯示TEM、SHV、CTX-M陽性率

4、分別為50.0％、20.0％和67.5％，產(chǎn)2種型別ESBLs的菌株達61.3％；對7株接合試驗陽性疑似產(chǎn)AmpC酶菌株提取其質粒DNA為模板，用PCR方法進行基因分型，，結果有4株為DHA型陽性，其中2株菌同時產(chǎn)ESBLs，高度疑似為產(chǎn)超超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(SSBL)菌株。隨機抽取5株ESBLs擴增陽性的PCR產(chǎn)物進行序列分析，其結果證實2株TEM型擴增產(chǎn)物均屬TEM-1型，經(jīng)NCBI基因庫查詢和BLASTn比對，與奇異變形桿菌(AY

5、729027)注冊的相應序列的核苷酸相似性分別為99.76％(835/837)、99.62％(847/851)，氨基酸相似性分別為100％、99.62％(259/260)；1株SHV型擴增產(chǎn)物屬于SHV-12型，與弗勞地枸櫞酸桿菌(AY826418)注冊的相應序列的核苷酸及氨基酸相似性均為100％；2株CTX-M型擴增產(chǎn)物分屬CTX-M3、CTX-M14型，分別與弗勞地枸櫞酸桿菌(Y10278)、液化沙雷氏菌((AF462398)注冊的

6、相應序列的核苷酸相似性為99.82％(534/536)、99.63(534/536)，氨基酸相似性為100％、99.45％(180/181)。 [結論] 腸桿菌科細菌抗生素耐藥性較嚴重，且呈多重耐藥模式；產(chǎn)ESBLs菌及疑似產(chǎn)AmpC酶菌占有重要地位，其耐藥性可通過接合傳遞；ESBLs基因分型以CTX-M型為主，其次為TEM型和SHV型，同時產(chǎn)2種以上酶菌株居多數(shù)，并發(fā)現(xiàn)可疑產(chǎn)超超廣譜酶(SSBL)菌株；其中CTX-M14、S