雞NDV野毒株部分生物學(xué)特性研究及不同來(lái)源NDV間抗原同源性比較.pdf

1、雞新城疫(ND)是雞的一種急性、高度接觸性、烈性、病毒性傳染病，對(duì)養(yǎng)禽業(yè)危害極大，被國(guó)際獸醫(yī)局(OIE)列為對(duì)動(dòng)物危害最大的A類(lèi)傳染病之一，每年給國(guó)家造成上百億元的經(jīng)濟(jì)損失。近年來(lái)，在新城疫Lasota疫苗免疫雞群及高抗體雞群中不斷有新城疫的發(fā)生。據(jù)報(bào)道，原因不僅與免疫方法、途徑、疫苗等有關(guān)，更重要的是與新城疫的毒株的變異，不同的基因型的出現(xiàn)有關(guān)。我國(guó)現(xiàn)行的疫苗株為Ⅰ系、Ⅱ系(B1)、Ⅲ系(F)、Ⅳ系(Lasota)和V4株等，均屬于經(jīng)

2、典型(基因Ⅰ型、Ⅱ型)。而流行毒株則屬于基因Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ，且每一次流行都有新的基因型或亞型出現(xiàn)，給目前僅有少數(shù)幾種疫苗來(lái)防制ND的可能性提出了質(zhì)疑。 本研究主要是通過(guò)PCR技術(shù)、血凝試驗(yàn)(HA)、血凝抑制試驗(yàn)(HI)等方法對(duì)NDV進(jìn)行分離鑒定及生物學(xué)特性研究，并對(duì)分離到的一株NDVLY-CX油乳苗的免疫保護(hù)性做了研究，通過(guò)血凝抑制試驗(yàn)(HI)和細(xì)胞上的病毒中和實(shí)驗(yàn)(Ⅵ)來(lái)對(duì)不同基因型的NDV做了抗原同源性性比較，進(jìn)一步闡明了為

3、什么在疫苗的免疫保護(hù)作用下禽類(lèi)仍能夠感染NDV。表明了新城疫流行的毒株基因型的變化及其與常規(guī)疫苗LaSota和我國(guó)所存標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒Y98F9之間的抗原性的差異。本課題分為以下三個(gè)部分進(jìn)行研究。 1.雞新城疫病毒中國(guó)野毒株的分離鑒定及部分生物學(xué)特性研究從來(lái)自某雞場(chǎng)送檢的疑似新城疫癥狀的六只病雞中，通過(guò)SPF雞胚培養(yǎng)，常規(guī)的病毒分離培養(yǎng)、血凝試驗(yàn)(HA)、血凝抑制試驗(yàn)(HI)以及提取2和AIVH5、H9單因子血清HI試驗(yàn)，動(dòng)物回歸試驗(yàn)，

4、MDT、ICPI和IVPI等毒力學(xué)指標(biāo)測(cè)定。結(jié)果表明，分離株的MDT為55h；ICPI為1.89；IVPI為2.63。分離株能被NDVLasota株陽(yáng)性血清中和，動(dòng)物回歸試驗(yàn)雞出現(xiàn)典型的新城疫癥狀。證明該毒株為新城疫強(qiáng)毒株。 2.不同來(lái)源新城疫病毒間的抗原同源性比較分別以雞新城疫病毒(NDV)的弱毒疫苗Lasota株、雞源野毒株Y98F9、NDVLY-CX株和鴿源野毒株P(guān)B9601為滅活疫苗制備相應(yīng)的抗血清。將四株病毒分別與相應(yīng)

5、的抗血清做交叉血凝抑制試驗(yàn)(HI)和在細(xì)胞培養(yǎng)上做交叉病毒中和反應(yīng)(Ⅵ)，以次來(lái)比較不同來(lái)源病毒間的抗原同源性關(guān)系。在交叉HI中，Lasota株與基因Ⅶ型的Y98F9間的同源性為90％，而基因Ⅵ型的鴿源NDV與Lasota株和Y98F9間的同源性?xún)H分別為65.2％和74.2％；雞新城疫病毒NDVLY-CX株和鴿新城疫病毒抗原性的同源性為79.67％，和雞新城疫疫苗毒Lasota株抗原性的同源性為86.26％，和雞新城疫病毒Y98F9株抗

6、原性的同源性為92.07％。在交叉Ⅵ中也表現(xiàn)非常類(lèi)似的同源性關(guān)系，Lasota株與Y98F9間的同源性為90.1％，而鴿源PB9601株與Lasota和Y98F9間的同源性?xún)H為65.8％和75％；雞新城疫病毒NDVLY-CX株和鴿新城疫病毒抗原性的同源性為80.01％，和雞新城疫疫苗毒Lasota株抗原性的同源性為86.74％，和雞新城疫病毒Y98F9株抗原性的同源性為92.96％。 3.NDVLY-CX株油乳苗免疫保護(hù)試驗(yàn)根據(jù)

7、從某雞場(chǎng)分離到的這株新城疫病毒NDVLY-CX，為了進(jìn)一步測(cè)定NDVLY-CX油乳苗的免疫保護(hù)效力，于是進(jìn)行了下面的動(dòng)物性試驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)選用150只健康1日齡AA肉雞，1日齡雛雞頸部皮下全部接種由法國(guó)英特威公司生產(chǎn)的(NDV)Ⅳ系(Lasota株)疫苗0.1ml，并隨機(jī)分為三組，做好嚴(yán)格的記錄和標(biāo)記。試驗(yàn)組一：3周后50只AA肉雞頸部皮下加強(qiáng)免疫由集團(tuán)生產(chǎn)的NDV疫苗0.2ml；試驗(yàn)組二：3周后50只AA肉雞頸部皮3做好嚴(yán)格的記錄和標(biāo)記。

8、試驗(yàn)組一：3周后50只AA肉雞頸部皮下加強(qiáng)免疫由集團(tuán)生產(chǎn)的NDV疫苗0.2ml；試驗(yàn)組二：3周后50只AA肉雞頸部皮下加強(qiáng)免疫英特威(NDV)Ⅳ系(Lasota株)疫苗0.2ml；實(shí)驗(yàn)組三：3周后50只AA肉雞0.2ml頸部皮下注射相應(yīng)的滅菌生理鹽水0.2ml作為對(duì)照。再過(guò)3周后，每只AA肉雞翅下靜脈接種NDVLY-CX0.2ml，并隨時(shí)觀察和記錄肉雞的生長(zhǎng)和死亡情況，實(shí)驗(yàn)日期為80天。通過(guò)動(dòng)態(tài)的觀測(cè)雛雞常規(guī)免疫后血清中新城疫抗體的變化

9、，并進(jìn)一步來(lái)比較AA肉雞加強(qiáng)免疫后抗體水平的變化與攻毒后抗體水平的變化之間的差異。研究的結(jié)果表明： 1.對(duì)于試驗(yàn)組三，肉雞的死亡率明顯比試驗(yàn)組一和試驗(yàn)組二大，而且其抗體水平也明顯的低于試驗(yàn)組一和試驗(yàn)組二，對(duì)死亡的肉雞，我們?cè)谄蕶z過(guò)程中可以明顯的看到腺胃乳頭有出血點(diǎn)，肌胃、腸管等均有不同程度的出血，具有明顯的NDV感染癥狀。 2.對(duì)于試驗(yàn)組一和試驗(yàn)組二我們可以得到這樣的結(jié)論，加強(qiáng)免疫后的血清中的抗體水平略低于攻毒后血清中的