4株NDV流行株的全基因測序分析及鴨源NDV HN蛋白的原核表達.pdf

1、新城疫(Newcastle disease，ND)是由新城疫病毒引起的能夠感染多種禽類的一種急性、高度傳染性疫病，是危害世界養(yǎng)禽業(yè)的重要傳染病之一，給許多國家的養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。NDV對多種禽類都具有致病性，除家禽外，至少250種鳥類可自然或?qū)嶒灨腥綨DV?；颌餍蚇DV是我國當前流行最廣的毒株。
　　 為研究近年來NDV的遺傳進化趨勢，本文通過克隆測序測定了兩株基因Ⅶ型雞源新城疫分離株Chicken/China/SD0

2、4/2011和Chicken/China/SDWF07/2011及兩株基因Ⅵ型鴿源新城疫分離株Pigeon/China/SDLC/2011和Pigeon/China/SDS/2011的全基因序列。4株病毒與中國標準強毒F48E8、國外標準強毒Hefts/33及疫苗株chicken/N.Ireland/Ulster/67、B、Clone30、LaSota、Mukteswar核苷酸序列同源性在80％～87％之間;其F蛋白前體F0裂解位點附近

3、的氨基酸序列均為112RRQKRF117，符合NDV強毒株的特征;兩株雞源病毒屬于基因Ⅶd亞型變異株;兩株鴿源毒株NP、P、L基因上某些氨基酸的改變與其宿主特異性及毒力方面的差異可能有關?？乖儺惙治鼋Y(jié)果顯示與單抗1E5反應陰性，初步推測并不是由HN蛋白347位氨基酸變異E→K(G)引起的，可能還有其他未知的因素決定了病毒與單抗1E5的反應特性。Pigeon/China/SDS/2011對鴿和雞的人工感染試驗結(jié)果顯示其對鴿具有較強的致病

4、性而對雞的致病性較弱。
　　 2009年本實驗室從發(fā)生NDV的鴨場分離得到一株鴨源新城疫病毒SD03，序列分析與致病性指數(shù)測定結(jié)果顯示為強毒株。但其對櫻桃谷鴨的攻毒試驗顯示，在實驗條件下SD03分離株對鴨不致病，只表現(xiàn)排毒。在本試驗中用原核表達載體pET28a對其HN蛋白開放閱讀框內(nèi)176～571位氨基酸（包含有5個與受體結(jié)合有關的區(qū)域）進行了表達。表達產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE檢測在49kDa位置處有明顯表達帶，表達產(chǎn)物經(jīng)鎳柱親和