重組H3N2亞型豬流感滅活疫苗及合成肽疫苗的初步研究.pdf

1、豬流感(Swine Influenza,S1)是由豬流感病毒(Swine Influenza Virus,SIV)引起的一種急性、高度接觸傳播的豬呼吸道傳染病,可引起病豬出現(xiàn)體溫增高、食欲不振、呼吸困難、咳嗽、流產(chǎn)、延遲出欄等癥狀,嚴(yán)重危害著世界養(yǎng)豬業(yè)。豬的呼吸道上皮細(xì)胞同時具有禽流感病毒和人流感病毒的受體,被認(rèn)為是流感病毒由“禽-人”傳播的重要中間宿主和新流行毒株產(chǎn)生的“孵育器”,而2009年甲型H1N1流感的大流行進(jìn)一步證實(shí)了SIV

2、的重要公共衛(wèi)生學(xué)意義。目前防控豬流感最有效的方法是免疫接種,但現(xiàn)有疫苗存在抗原變異頻繁、交叉保護(hù)力不強(qiáng)的問題。本研究通過反向遺傳技術(shù)獲得雞胚繁殖力較強(qiáng)的重組H3N2病毒,制備滅活疫苗并在小鼠上評價其免疫原性和保護(hù)效力。此外,還將重組H3N2滅活疫苗與M2e分支肽疫苗共同免疫小鼠,發(fā)現(xiàn)M2e分支肽顯著增強(qiáng)了重組滅活疫苗的交叉保護(hù)能力,研究主要從以下方面開展:
　　 本研究根據(jù)A型流感病毒基質(zhì)蛋白(matrix protein,M)

3、基因保守序列設(shè)計(jì)并合成特異性引物和TaqMan BHQ探針,利用實(shí)時熒光定量RT-PCR技術(shù)建立A型流感病毒的快速檢測方法。該方法敏感性、特異性和重復(fù)性良好,對40份實(shí)驗(yàn)感染樣品的檢測結(jié)果表明,與常規(guī)RT-PCR檢測方法相比,該方法靈敏度更高,特異性更強(qiáng)。此方法可應(yīng)用于流感病毒的監(jiān)測和致病機(jī)理的研究。
　　 流感病毒M2蛋白N端的23個氨基酸(M2e)非常保守,是研究具有廣譜交叉保護(hù)能力的“通用疫苗”的理想靶標(biāo)。本研究將4個拷貝

4、的M2e通過賴氨酸與通用Th細(xì)胞表位偶聯(lián)獲得M2e分支肽(M2e-MAP),添加弗氏佐劑免疫小鼠,結(jié)果顯示:其能誘導(dǎo)高水平的M2e特異性IgG抗體,能有效限制PR8(H1N1)、SwGD96(H1N1)和SwHLJ1(H3N2)病毒在肺臟中的復(fù)制,減輕肺臟病理變化,針對致死劑量的PRS(H1N1)病毒的攻擊,M2e-MAP+Freund疫苗免疫能顯著緩解小鼠食欲減退、發(fā)熱、顫栗等臨床癥狀,并提供有效的免疫保護(hù)(保護(hù)率達(dá)100％)。上述結(jié)

5、果給未來通用疫苗的研究提供了一定參考。
　　 H3N2亞型SIV在世界豬群中廣泛流行,本研究利用反向遺傳技術(shù)獲得了雞胚繁殖力較強(qiáng)的重組H3N2(rgH3N2)病毒,其HA和NA基因來源于H3N2病毒,其它六個內(nèi)部基因來源PR8毒株,制備滅活疫苗并在小鼠上評價其免疫原性和保護(hù)效力。此外,本研究還將重組滅活疫苗與M2e分支肽共同免疫小鼠。結(jié)果顯示:重組H3N2滅活疫苗免疫可刺激小鼠產(chǎn)生高滴度的HI抗體和中和抗體,并能有效限制病毒在肺

6、臟內(nèi)的復(fù)制,對H3N2病毒的攻擊能夠提供100％的保護(hù),但其對異源病毒的交義保護(hù)力較差；而添加M2e分支肽共同免疫能夠誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生高水平的HI抗體、中和抗體(與重組滅活疫苗單獨(dú)免疫水平相當(dāng))及rgrt3N2和M2e分支肽特異性的IgG抗體；M2e分支肽的添加顯著增強(qiáng)了重組滅活疫苗對異源病毒的免疫保護(hù)作用,能有效限制SwGD96(H1N1)和PR8(H1N1)病毒在肺臟內(nèi)的復(fù)制并減輕肺臟的病理變化,對PR8(H1N1)病毒的致死性攻擊可提