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文檔簡介
1、流行性感冒是由流感病毒引起的急性呼吸道傳染病,對人群健康,社會穩(wěn)定均產(chǎn)生重大影響。降低流感流行的最有效手段仍是接種流感疫苗,然而,由于流感病毒血清亞型眾多,變異性強(qiáng),因此設(shè)計開發(fā)安全的且可提供長久保護(hù)的,對多亞型流感共保護(hù)的新型流感疫苗勢在必行。
根據(jù)當(dāng)前流感的流行現(xiàn)狀和高致病性禽流感病毒跨種間傳播的現(xiàn)狀,本研究在本實驗室已構(gòu)建好的表位盒基礎(chǔ)上,加以改進(jìn)并合成了兩個表位盒(H5亞型 Th/B,CTL表位盒)。另外,采用基因串聯(lián)
2、的方式,構(gòu)建了兩種核酸疫苗質(zhì)粒(pVAX1-NP-ECH5、pVAX1-H3-ETH5-H1HA1)。為了驗證其能否用于進(jìn)一步的體內(nèi)試驗,本研究以脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染BHK細(xì)胞,分別以RT-PCR和IFA對外源基因轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)及表達(dá)產(chǎn)物生物學(xué)活性進(jìn)行了鑒定。結(jié)果顯示RT-PCR均檢測到外源基因的mRNA轉(zhuǎn)錄情況;IFA檢測到了特異性熒光,說明表達(dá)產(chǎn)物具有相應(yīng)的生物學(xué)活性。這說明各抗原組分可以在真核細(xì)胞中有效表達(dá),為進(jìn)一步動物實驗免疫研究奠定了
3、基礎(chǔ)。
本研究以小鼠模型作為哺乳動物模型,對之前構(gòu)建的多表位核酸疫苗進(jìn)行了免疫研究,對疫苗的免疫原性進(jìn)行了評估。血清 ELISA抗體檢測結(jié)果顯示:添加表位疫苗組(ThB、CTL表位)激發(fā)了與抗原單表達(dá)組相當(dāng)?shù)目贵w水平,且并在H5亞型流感病毒特異性 ELISA抗體水平顯示了優(yōu)勢。細(xì)胞因子 IL-4、IFN-γ檢測結(jié)果顯示:表位組分的加入顯著上調(diào)了小鼠Th2細(xì)胞免疫功能,且CTL表位與NP串聯(lián)免疫,可有效刺激了T淋巴細(xì)胞IFN-γ
4、分泌。淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗結(jié)果表明:添加表位的DNA疫苗可刺激小鼠產(chǎn)生較強(qiáng)的特異性和非特異性增殖能力,免疫組小鼠的脾臟T淋巴細(xì)胞無論是特異性刺激指數(shù)還是非特異性刺激指數(shù)均明顯高于對照組,且優(yōu)于未添加表位DNA疫苗組。
以上實驗結(jié)果顯示,本研究構(gòu)建的以H3HA和H1HA1融合表達(dá)基因為骨架嵌合加入多表位基因的核酸疫苗,小鼠免疫實驗顯示,其不僅產(chǎn)生針對H3、H1 HA產(chǎn)生了特異性免疫應(yīng)答(抗體和特異性細(xì)胞免疫),還增加了其抗 H5亞型
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