H3-H1亞型流感核酸疫苗的構(gòu)建及小鼠免疫試驗.pdf

1、流行性感冒是由流感病毒引起的急性呼吸道傳染病，對人群健康，社會穩(wěn)定均產(chǎn)生重大影響。降低流感流行的最有效手段仍是接種流感疫苗，然而，由于流感病毒血清亞型眾多，變異性強，因此設(shè)計開發(fā)安全的且可提供長久保護的，對多亞型流感共保護的新型流感疫苗勢在必行。
　　根據(jù)當(dāng)前流感的流行現(xiàn)狀和高致病性禽流感病毒跨種間傳播的現(xiàn)狀，本研究在本實驗室已構(gòu)建好的表位盒基礎(chǔ)上，加以改進并合成了兩個表位盒（H5亞型 Th/B,CTL表位盒）。另外，采用基因串聯(lián)

2、的方式，構(gòu)建了兩種核酸疫苗質(zhì)粒（pVAX1-NP-ECH5、pVAX1-H3-ETH5-H1HA1）。為了驗證其能否用于進一步的體內(nèi)試驗，本研究以脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染BHK細(xì)胞，分別以RT-PCR和IFA對外源基因轉(zhuǎn)錄和蛋白表達及表達產(chǎn)物生物學(xué)活性進行了鑒定。結(jié)果顯示RT-PCR均檢測到外源基因的mRNA轉(zhuǎn)錄情況；IFA檢測到了特異性熒光，說明表達產(chǎn)物具有相應(yīng)的生物學(xué)活性。這說明各抗原組分可以在真核細(xì)胞中有效表達，為進一步動物實驗免疫研究奠定了

3、基礎(chǔ)。
　　本研究以小鼠模型作為哺乳動物模型，對之前構(gòu)建的多表位核酸疫苗進行了免疫研究，對疫苗的免疫原性進行了評估。血清 ELISA抗體檢測結(jié)果顯示：添加表位疫苗組（ThB、CTL表位）激發(fā)了與抗原單表達組相當(dāng)?shù)目贵w水平，且并在H5亞型流感病毒特異性 ELISA抗體水平顯示了優(yōu)勢。細(xì)胞因子 IL-4、IFN-γ檢測結(jié)果顯示：表位組分的加入顯著上調(diào)了小鼠Th2細(xì)胞免疫功能，且CTL表位與NP串聯(lián)免疫，可有效刺激了T淋巴細(xì)胞IFN-γ

4、分泌。淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗結(jié)果表明：添加表位的DNA疫苗可刺激小鼠產(chǎn)生較強的特異性和非特異性增殖能力，免疫組小鼠的脾臟T淋巴細(xì)胞無論是特異性刺激指數(shù)還是非特異性刺激指數(shù)均明顯高于對照組，且優(yōu)于未添加表位DNA疫苗組。
　　以上實驗結(jié)果顯示，本研究構(gòu)建的以H3HA和H1HA1融合表達基因為骨架嵌合加入多表位基因的核酸疫苗，小鼠免疫實驗顯示，其不僅產(chǎn)生針對H3、H1 HA產(chǎn)生了特異性免疫應(yīng)答（抗體和特異性細(xì)胞免疫），還增加了其抗 H5亞型