H3-H1亞型流感核酸疫苗的構(gòu)建及小鼠免疫試驗(yàn).pdf

1、流行性感冒是由流感病毒引起的急性呼吸道傳染病，對(duì)人群健康，社會(huì)穩(wěn)定均產(chǎn)生重大影響。降低流感流行的最有效手段仍是接種流感疫苗，然而，由于流感病毒血清亞型眾多，變異性強(qiáng)，因此設(shè)計(jì)開(kāi)發(fā)安全的且可提供長(zhǎng)久保護(hù)的，對(duì)多亞型流感共保護(hù)的新型流感疫苗勢(shì)在必行。
　　根據(jù)當(dāng)前流感的流行現(xiàn)狀和高致病性禽流感病毒跨種間傳播的現(xiàn)狀，本研究在本實(shí)驗(yàn)室已構(gòu)建好的表位盒基礎(chǔ)上，加以改進(jìn)并合成了兩個(gè)表位盒（H5亞型 Th/B,CTL表位盒）。另外，采用基因串聯(lián)

2、的方式，構(gòu)建了兩種核酸疫苗質(zhì)粒（pVAX1-NP-ECH5、pVAX1-H3-ETH5-H1HA1）。為了驗(yàn)證其能否用于進(jìn)一步的體內(nèi)試驗(yàn)，本研究以脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染BHK細(xì)胞，分別以RT-PCR和IFA對(duì)外源基因轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)及表達(dá)產(chǎn)物生物學(xué)活性進(jìn)行了鑒定。結(jié)果顯示RT-PCR均檢測(cè)到外源基因的mRNA轉(zhuǎn)錄情況；IFA檢測(cè)到了特異性熒光，說(shuō)明表達(dá)產(chǎn)物具有相應(yīng)的生物學(xué)活性。這說(shuō)明各抗原組分可以在真核細(xì)胞中有效表達(dá)，為進(jìn)一步動(dòng)物實(shí)驗(yàn)免疫研究奠定了

3、基礎(chǔ)。
　　本研究以小鼠模型作為哺乳動(dòng)物模型，對(duì)之前構(gòu)建的多表位核酸疫苗進(jìn)行了免疫研究，對(duì)疫苗的免疫原性進(jìn)行了評(píng)估。血清 ELISA抗體檢測(cè)結(jié)果顯示：添加表位疫苗組（ThB、CTL表位）激發(fā)了與抗原單表達(dá)組相當(dāng)?shù)目贵w水平，且并在H5亞型流感病毒特異性 ELISA抗體水平顯示了優(yōu)勢(shì)。細(xì)胞因子 IL-4、IFN-γ檢測(cè)結(jié)果顯示：表位組分的加入顯著上調(diào)了小鼠Th2細(xì)胞免疫功能，且CTL表位與NP串聯(lián)免疫，可有效刺激了T淋巴細(xì)胞IFN-γ

4、分泌。淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)結(jié)果表明：添加表位的DNA疫苗可刺激小鼠產(chǎn)生較強(qiáng)的特異性和非特異性增殖能力，免疫組小鼠的脾臟T淋巴細(xì)胞無(wú)論是特異性刺激指數(shù)還是非特異性刺激指數(shù)均明顯高于對(duì)照組，且優(yōu)于未添加表位DNA疫苗組。
　　以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，本研究構(gòu)建的以H3HA和H1HA1融合表達(dá)基因?yàn)楣羌芮逗霞尤攵啾砦换虻暮怂嵋呙纾∈竺庖邔?shí)驗(yàn)顯示，其不僅產(chǎn)生針對(duì)H3、H1 HA產(chǎn)生了特異性免疫應(yīng)答（抗體和特異性細(xì)胞免疫），還增加了其抗 H5亞型