H3N2亞型豬流感病毒致病性試驗及其反向遺傳操作系統(tǒng)的構(gòu)建.pdf

1、豬擁有兩種唾液酸受體（SAα-2，3-Ga1和SAα-2，6-Ga1），使其可以被人或禽流感病毒感染，因此被看作產(chǎn)生重組病毒的“混合容器”。2009年H1N1亞型流感病毒(pdm/09)大暴發(fā)，引起人類流感大流行，并引入到豬群中，目前，豬群中出現(xiàn)多種形式重組的豬流感病毒(Swine Influenza Virus，SIV)。因此，加強對SIV的監(jiān)控并了解其生物學特性對于防控人流感暴發(fā)具有重要的公共衛(wèi)生意義。
　　為了闡明新型重組H

2、3N2亞型SIVs對豬的致病性，本研究選用攜帶pdm09病毒的內(nèi)部基因(PB2、PB1、PA、NP和M)和季節(jié)性人流感病毒的表面基因（HA和NA）獲得的兩株H3N2亞型SIVs，即A/Swine/Guangxi/NNXD/2013和A/Swine/Guangxi/JG1/2014（分別簡稱為NNXD和JG1），分別通過氣管接種途徑感染10只仔豬，每組4只，陰性對照2只。感染結(jié)果發(fā)現(xiàn)在感染后3天和5天的鼻拭子中均能檢測到病毒，說明感染流感

3、病毒后豬可以通過鼻腔進行排毒。3 dpi和5 dpi剖殺發(fā)現(xiàn)，兩組病毒都能在肺臟中復制，其中JG1組肺組織和肺洗液中的病毒含量更高（肺組織可達104PFU/mL，肺洗液中可達104.91 PFU/mL），肺部病變方面，肺泡結(jié)構(gòu)破壞更嚴重，炎性反應更明顯。
　　為了探索NS基因在引起豬致病性差異方面的作用，本實驗通過RT-PCR技術(shù)分別對NNXD株的8個基因片段及JG1株的NS片段進行了特異性擴增，再經(jīng)過一系列克隆技術(shù)，將這些片段分