納米乳與普洱茶提取物作為H3N2流感病毒滅活疫苗佐劑的免疫效果及安全性的初步研究.pdf

1、流感是由流感病毒引起的一種急性呼吸道傳染病，其傳染性強(qiáng)，傳播速度快，容易引起在世界范圍內(nèi)的廣泛流行，是嚴(yán)重危害人類健康及社會安全的重要傳染病之一。流感病毒可分為甲(A)、乙(B)、丙(C)三型，其中甲型流感病毒的抗原性較易發(fā)生變異，曾多次引起世界性的流感大流行，導(dǎo)致了大量的人員死亡與巨大的經(jīng)濟(jì)損失。
　　目前預(yù)防流感的最主要手段就是接種流感疫苗，傳統(tǒng)的流感疫苗主要以雞胚為生產(chǎn)基質(zhì)，由于生產(chǎn)方法與生產(chǎn)工藝的限制，很難在流感大流行爆發(fā)

2、時(shí)，短時(shí)間內(nèi)向人群提供足夠的疫苗。而在傳統(tǒng)的流感疫苗中加入安全有效的佐劑，可以增強(qiáng)抗原的免疫原性，顯著降低疫苗的抗原用量，這樣，不但可以保證在流感大流行時(shí)人群可以及時(shí)的接種流感疫苗，還可以降低疫苗的制造成本。
　　在前期研究工作的基礎(chǔ)上，本課題主要對納米乳佐劑及普洱茶提取物作為流感疫苗佐劑的免疫效果及安全性等進(jìn)行了相關(guān)研究，從中得到的一些結(jié)果希望能為疫苗佐劑的進(jìn)一步深入研究和應(yīng)用提供一些思路與依據(jù)。
　　第一部分納米乳作為H

3、3N2流感病毒滅活疫苗佐劑的相關(guān)研究
　　納米乳是一種由油相、水相、表面活性劑、助表面活性劑按適當(dāng)?shù)谋壤旌辖M成的一種熱力學(xué)穩(wěn)定的均相分散體系。由于其對疫苗抗原具有顯著的緩釋作用，能夠誘導(dǎo)高水平抗體的產(chǎn)生，并且能夠引起良好的細(xì)胞免疫應(yīng)答，因而將其作為疫苗佐劑的研究展現(xiàn)出了良好的發(fā)展前景。
　　本實(shí)驗(yàn)首先選擇以白油、液體石蠟作為油相，然后通過選取不同的表面活性劑、助表面活性劑與以上兩種油相進(jìn)行組合，將以上三種組分進(jìn)行混勻，在不

4、斷攪拌的條件下通過加水滴定法配制納米乳，并通過繪制偽三元相圖，尋找油相、表面活性劑、助表面活性劑之間的最優(yōu)比例，從而配制出穩(wěn)定清透的納米乳劑。本實(shí)驗(yàn)通過篩選，選取了Tween20、Span80、1，2-丙二醇、液體石蠟配方，并按最優(yōu)比例配制出清透乳劑。之后對其理化性質(zhì)進(jìn)行了相關(guān)檢測。在此之后，將其配制成疫苗免疫小鼠，結(jié)果卻并不理想，含有納米乳佐劑的組，小鼠抗體效價(jià)均難以起來，甚至達(dá)不到無佐劑疫苗組的效果。
　　之后，對此配方中水相

5、的加入量進(jìn)行了調(diào)整，在配制方法上做出了調(diào)整，重新進(jìn)行了動物實(shí)驗(yàn)，并設(shè)置了低抗原劑量組，結(jié)果納米乳佐劑組產(chǎn)生了良好的免疫佐劑效果，其產(chǎn)生的抗體效價(jià)均高于鋁佐劑疫苗組，更要遠(yuǎn)高于無佐劑疫苗組，在較低抗原劑量的情況下，其產(chǎn)生的免疫效果也要遠(yuǎn)高于無佐劑組。脾淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)顯示納米乳佐劑能夠顯著提高細(xì)胞免疫應(yīng)答水平。通過對初免后7天內(nèi)小鼠的體重進(jìn)行監(jiān)測，未見乳劑組小鼠體重變化與其他組有顯著性差異。納米乳佐劑急性毒性試驗(yàn)，在最大給藥量條件下各組小

6、鼠7天之內(nèi)全部存活，且未見明顯的毒性反應(yīng)，7天后處死小鼠進(jìn)行解剖，未見小鼠體內(nèi)各臟器有明顯的病變，因此初步判定此種液體石蠟納米乳佐劑是一種安全有效的疫苗候選佐劑。
　　第二部分普洱茶提取物作為H3N2流感病毒滅活疫苗佐劑的相關(guān)研究
　　普洱茶是原產(chǎn)于我國云南的歷史名茶，具有降血脂、降血壓、預(yù)防心血管疾病等保健功效，特別是其還具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力的功效。本實(shí)驗(yàn)采用普洱茶提取物作為疫苗佐劑，免疫小鼠，測定血凝抑制抗體效價(jià)，結(jié)果顯示

7、，普洱茶提取物佐劑組的抗體效價(jià)雖低于氫氧化鋁佐劑組的抗體效價(jià)，但是要顯著高于無佐劑疫苗組的抗體效價(jià)，重復(fù)驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果證明普洱茶提取物具有明顯的佐劑效果。初免后連續(xù)7天監(jiān)測小鼠體重變化，結(jié)果未見其體重變化與對照組小鼠有明顯差異，初步表明其具有良好的安全性。對實(shí)驗(yàn)組小鼠進(jìn)行體外脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示，普洱茶提取物佐劑組淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)要顯著高于無佐劑疫苗組，證明其確能有效刺激小鼠脾淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化增殖。由以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，普洱茶提取