海產(chǎn)貝類派琴蟲免疫熒光檢測(cè)技術(shù)研究.pdf

1、派琴蟲（也稱為帕金蟲，英文名稱Perkinsus）是影響世界海產(chǎn)貝類養(yǎng)殖和發(fā)展的主要病原之一，在世界各地廣泛流行。其精典的檢測(cè)方法為巰基醋酸鹽培養(yǎng)基(FTM)培養(yǎng)，但該方法相對(duì)耗時(shí)，培養(yǎng)方法也比較復(fù)雜，仍需要其它輔助方法方可確定為陽(yáng)性蟲體。為了滿足對(duì)派琴蟲快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)需求，本研究制備了派琴蟲特異性抗原及其相應(yīng)的特異性單克隆抗體，并在此基礎(chǔ)上建立了派琴蟲免疫熒光檢測(cè)方法。
　　根據(jù)GenBank公布的派琴蟲CB5D4細(xì)胞壁蛋白基

2、因序列設(shè)計(jì)并合成引物，成功擴(kuò)增出派琴蟲CB5D4基因，并運(yùn)用分子克隆方法構(gòu)建了派琴蟲CB5D4-pMD19Tsimple質(zhì)粒，將CB5D4基因與原核表達(dá)載體pET32a連接后，轉(zhuǎn)入BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞中獲得表達(dá)菌種，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)并表達(dá)后，通過(guò)SDS-PAGE檢測(cè)，結(jié)果表明，該基因編碼的蛋白以可溶形式表達(dá)。將該蛋白純化后免疫小鼠，運(yùn)用單克隆抗體技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞融合、亞克隆、克隆、建株后，共篩選出6株抗派琴蟲細(xì)胞壁蛋白的單克隆抗體細(xì)胞