細粒棘球絳蟲感染犬及EgM9蛋白免疫犬引起的免疫應(yīng)答研究.pdf

1、目前，國內(nèi)外對宿主抗細粒棘球絳蟲免疫的研究主要集中在宿主體內(nèi)的免疫保護、免疫逃避與免疫損傷機制。有很多關(guān)于細粒棘球絳蟲病的中間宿主的免疫抗原Eg95的研究報道，但對終末宿主犬的免疫保護抗原還在研究當中。本研究通過免疫組織化學方法與分子生物學方法，探索宿主感染細粒棘球絳蟲和EgM9蛋白免疫后，機體外周免疫系統(tǒng)、腸道的粘膜免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫應(yīng)答的情況，以期為臨床研制相關(guān)疫苗提供實驗依據(jù)。
　　 本研究首先經(jīng)pET-41b重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的

2、大腸埃希菌（BL-21）對EgM9蛋白進行誘導(dǎo)表達，通過SDS-PAGE對表達產(chǎn)物進行分析，證明所表達的確實為EgM9蛋白，再對其進行純化，得到符合免疫抗原要求的EgM9重組目的蛋白。
　　 將實驗犬分為四組（Ⅰ組：EgM9蛋白免疫組；Ⅱ組：EgM9蛋白免疫后感染原頭蚴組；Ⅲ組：直接感染原頭蚴組；Ⅳ組：空白對照組），用純化后的EgM9蛋白對Ⅰ組和Ⅱ組進行免疫試驗，再分別對Ⅱ組和Ⅲ組人工感染原頭蚴。將實驗犬剖檢后進行荷蟲數(shù)計算，結(jié)

3、果表明用EgM9蛋白免疫犬后，可以使犬取得一定的免疫保護效果。
　　 采集實驗犬的腸系膜淋巴結(jié)和小腸，依據(jù)免疫酶組織化學和免疫熒光組織化學原理，運用直接法和抗原~抗體~抗體標記物法對其進行檢測。直接法結(jié)果表明Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組犬的腸系膜淋巴結(jié)和小腸上存在IgG抗體，反應(yīng)都呈陽性；抗原~抗體~抗體標記物法結(jié)果表明Ⅰ組、Ⅱ組表現(xiàn)陽性，而Ⅲ組呈陰性，熒光顯微鏡下有明顯的熒光位點，說明該方法可以對免疫犬的腸系膜淋巴結(jié)和小腸上的IgG進行定

4、位檢測。
　　 通過Real-Time PCR對上述實驗犬的腸系膜淋巴結(jié)和小腸組織中的三種細胞因子（IL-4、TGF-β和INF-γ）檢測，表明I組和Ⅲ組實驗犬的腸系膜淋巴結(jié)和小腸中IL-4與INF-γ均有明顯變化，IL-4的數(shù)值遠高于INF-γ，而在II組中，IL-4的數(shù)值雖然也高于INF-γ，但IL-4與INF-γ的數(shù)值同時也高于其他兩組。結(jié)果表明不論對犬進行免疫還是感染，都能引起Th1型和Th2型反應(yīng)，但以Th2型反應(yīng)為主