豬源大腸桿菌耐藥性調(diào)查與I型整合子-基因盒分子流行病學(xué)研究.pdf

1、細(xì)菌耐藥性問題已經(jīng)成為全球關(guān)注的一個熱點。大腸桿菌作為人和動物體內(nèi)的常在菌，其耐藥水平的高低具有一定的代表性。存在于細(xì)菌質(zhì)粒中的整合子結(jié)構(gòu)，能夠整合各種耐藥基因盒并在同種或不同種細(xì)菌間進(jìn)行水平傳播，進(jìn)而引起細(xì)菌耐藥性普遍升高和多重耐藥日趨嚴(yán)重的現(xiàn)狀。因此了解規(guī)?；B(yǎng)豬場大腸桿菌的耐藥水平，研究Ⅰ型整合子的的類型及其流行狀況，分析其耐藥基因盒與多重耐藥現(xiàn)象之間的關(guān)系，為了解細(xì)菌耐藥性現(xiàn)狀，指導(dǎo)臨床合理用藥以及針對目前耐藥現(xiàn)狀制定防控措施提

2、供試驗依據(jù)。
　　 本研究采用微量肉湯稀釋法測定159株豬源大腸桿菌對8類14種抗菌藥物的耐藥性。試驗結(jié)果表明:159株大腸桿菌對四環(huán)素、磺胺異惡唑、新諾明的耐藥率最高，為100％;所有菌株對奧格門丁均表現(xiàn)為敏感;而對頭孢唑啉、頭孢噻呋和多粘菌素的耐藥率較低，分別為5.03％(8株)、5.66％(9株)和2.52％(2株)。多重耐藥范圍為3耐～11耐。其中以7耐為最多，耐藥菌株的比例占到24.44％，其次分別為9耐、8耐、6耐、

3、5耐，耐藥菌株的比例分別為17.94％、17.15％、12.93％、12.66％。
　　 本試驗采用PCR方法調(diào)查豬源大腸桿菌Ⅰ型整合子的流行病學(xué)，以擴(kuò)增出5'端的保守序列Ⅰ型整合酶基因(int(I)1基因)為判定存在Ⅰ型整合子的依據(jù)。采用PCR方法、PCR產(chǎn)物同源性酶譜分析及直接測序三種方法結(jié)合進(jìn)行耐藥基因盒的調(diào)查。研究得出:從豬場分離的119株大腸桿菌中，共92株分離菌有Ⅰ型整合子整合酶基因及耐藥基因盒插入?yún)^(qū)擴(kuò)增片段，檢出率

4、達(dá)77.31％。92株Ⅰ型整合子攜帶大腸桿菌共擴(kuò)增出7類不同大小的基因盒插入?yún)^(qū)片段，大小分別為1008bp、1318bp、1586bp、1663bp、1913bp、1945bp、3149bp，其中以大小為1008bp的插入?yún)^(qū)片段的檢出率最高為31.67％。而檢出率最低的為長度為1318bp的基因盒插入?yún)^(qū)。將基因盒插入?yún)^(qū)擴(kuò)增片段的測序結(jié)果與Genebank中的相關(guān)序列進(jìn)行比對，分析其攜帶基因盒的同源性。試驗檢測的Ⅰ型整合子攜帶的耐藥基因為