牛源大腸桿菌耐藥性及耐藥機(jī)制研究.pdf

1、致病性大腸桿菌是引起犢牛白痢的主要病原菌,近年來其耐藥性在全球普遍呈迅速上升趨勢。許多國家和地區(qū)通過對犢牛白痢的流行病學(xué)調(diào)查和牛源大腸桿菌的耐藥性監(jiān)測,積累了翔實的牛源大腸桿菌耐藥性及其流行資料,并結(jié)合分子生物學(xué)方法研究了牛源大腸桿菌耐藥性的傳播規(guī)律,這些研究對所在地區(qū)犢牛白痢的防治和治療發(fā)揮了重要作用。黑龍江省關(guān)于牛源大腸桿菌的研究較少,尤其犢牛大腸桿菌的耐藥性及其傳播仍缺乏詳細(xì)的研究資料。為此,我們對黑龍江周邊地區(qū)養(yǎng)牛場的大腸桿菌進(jìn)

2、行了分離鑒定,對耐藥譜和耐藥基因進(jìn)行了研究,并比較了基因分型和耐藥表型的相關(guān)性。
　　 本研究采用細(xì)菌學(xué)方法分離鑒定大腸桿菌,采用WHO推薦的K-B紙片法研究不同來源的菌株對13種抗菌藥物的敏感性。獲得26株犢牛源耐藥大腸桿菌。這些耐藥菌對8種藥物產(chǎn)生了耐藥性,其中牛源大腸桿菌對鏈霉素、阿莫西林、四環(huán)素、復(fù)方新諾明和多西環(huán)素的耐藥率較高,對前四種藥物的耐藥率達(dá)到了100％,對多西環(huán)素的耐藥率也高達(dá)96.15％;但耐藥菌株對慶大霉

3、素、丁胺卡那霉素、多粘菌素B和新霉素表現(xiàn)為100％敏感,對恩諾沙星、環(huán)丙沙星、諾氟沙星和氯霉素耐藥程度較低,耐藥率分別為3.85％、8.89％和11.54％和19.23％。由此可見,養(yǎng)牛場大腸桿菌分離株的多重耐藥現(xiàn)象較嚴(yán)重。
　　 本研究考察了不同型別ESBLS基因CTX-M、TEM、SHV在以上分離菌株中的流行情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn):blaCTX-M基因檢出的陽性率為19.23％;blaTEM基因檢出的陽性率為84.62％;blaSH

4、V基因未檢出。發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒介導(dǎo)的ESBLS的產(chǎn)生和傳播是導(dǎo)致分離菌株對β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物耐藥的重要機(jī)制;耐藥菌株中檢出2種氨基糖苷類乙?；D(zhuǎn)移酶基因,aadA1基因檢出的陽性率為73.33％,aac(3)-Ⅱ基因檢出的陽性例率為11.54％。aadA1基因主要對鏈霉素產(chǎn)生耐藥性,結(jié)果表明對氨基糖苷類耐藥的主要機(jī)制是細(xì)菌產(chǎn)生氨基糖苷類修飾酶;氯霉素耐藥基因檢測結(jié)果顯示:cmtA基因檢出的陽性率為45.15％,floR基因檢出的陽性率為19.

5、23％。這些耐藥菌株的出現(xiàn)勢必給臨床治療帶來困難。應(yīng)注意臨床合理用藥,控制耐藥趨勢的發(fā)展。
　　 采用PCR技術(shù)從耐氟喹諾酮類藥物的大腸桿菌中選取4株擴(kuò)增了GyrA基因、GyrB基因和ParC基因的喹諾酮耐藥決定區(qū)(ORDR)。通過PCR產(chǎn)物發(fā)現(xiàn)A7菌株GyrA亞基發(fā)生了Ser83→Leu的氨基酸替代;4株菌ParC亞基上發(fā)生了Ser80→Arg、Ile氨基酸替代類型,并且證明GyrA、ParC亞基上發(fā)生的氨基酸替代是該地區(qū)耐藥

6、菌對氟喹諾酮類藥物產(chǎn)生耐藥性的主要機(jī)制之一。
　　 采用脈沖場凝膠電泳(PFGE)對牛源耐藥大腸桿菌進(jìn)行研究,并將其結(jié)果與耐藥表型結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果表明:26株菌可分為A～G共10型,其中B型被分了B1、B2和B3三個亞型。試驗結(jié)果表明耐藥表型和基因圖譜并不是完全對應(yīng)關(guān)系,但耐藥表型相同的菌株其PFGE電泳圖譜相同的概率較高,同一養(yǎng)殖場不同耐藥表型的菌株都存在PFGE指紋圖譜完全相同菌株,相同PFGE分型的菌株其耐藥譜型不一定相