牛源大腸桿菌Ⅰ型整合子的調(diào)查及對氟苯尼考耐藥性的研究.pdf

1、Y 7 7 3 5 3 0分類號：密級：哼目差≮夭等。博士學位論文單位代碼：1 0 0 1 9學 號：B 0 2 2 0 3牛源大腸桿菌I 型整合子的調(diào)查及對氟苯尼考耐藥性的研究S t u d i e so n e p i d e m i o l o g y o f c l a s s Ii n t c g r o n a m o n g b o v i n eEc o l ia n d m e c h a n i s m o f i

2、t sr e s i s t a n c et of l o r f e n i c o l研 究 生：指 導(dǎo) 教 師：中請學位門類級別；專 業(yè) 名 稱：研 究 方 向：所 在 學 院：掛囪堂選壅壘煎蕉．盎堂懂±．墅g 蘭匡堂蘭匡蔓墨堂墨墨墨生疊塹匿堂睦2 0 0 5 年5 月A B S T R A C TT h ed e v e l o p m e n t o f a n t i m i c r o b i a lr e s

3、 i s t a n c ef r o mp a t h o g e no fa n i m a lo r i g i nh a sb e c o m eam a j o rp u b l i ch e a l t hp r o b l e ma t t r a c t i n gt h eg l o b a la t t e n t i o na n dp o s i n gp o t e n t i a ld a n g e r t

4、 oa n i m a lp r o d u c t i o na n dh u m a n h e a l t h ．I no r d e rt op e r f o r mh a z a r da n a l y s i sa n da s s e s s m e n to f b a c t e r i a lr e s i s t a n c eo f a n i m a lo r i g i n ，i nt h i ss t

5、u d y ，t h ep a t h o g e n i cb o v i n eE s c h e r i c h i ac o l ii s o l a t e sw h i c hw e r ec o l l e c t e df r o mb e i j i n gs u r r o u n d i n g r e g i o n w e r e c h a r a c t e r i z e d f o r s e r o

6、g r o u p sa n d a n t i m i c r o b i a l s u s c e p t i b i l i t y p a t t e r n ．T h ei n v e s t i g a t i o n a n da n a l y s i so nt h em o l e c u l a re p i d e m i o l o g yo f i n t e g r o n s ／g e n ec a s

7、 s e t t e si n t h e s eE c o l ii s o l a t e sb y P C R t e c h n i q u ea n d d i r e c ts e q u e n c i n g w e r e c a r r i e do u t ．S u b s e q u e n t l y , t h r e e f l o Rg e n e sw e r ec l o n e df r o mc

8、a l f p a t h o g e n i cE c o l is t r a i n s ．B a s e do na n a l y s i so f t h e p o s s i b l eu p s t r e a mr e g u l a t o r yr e g i o n o f t h e f l o R g e n e ，t h ef l o r f e n i c o l - r e s i s t a n t

9、s t r a i nJ M l 0 9 - R w a sc o n s t r u c t e d ．I no r d e rt oi n v e s t i g a t ew h e t h e rt h ep h e n o t y p e o f E ．c o l ir e s i s t a n c et of l o r f e n i e o lw a s d u e t oe x p r e s s i o no f

10、t h ep u t a t i v ee f f l u xo f t h ef l o Rp r o t e i n ，am o d i f i e dh i 曲p e r f o r m c e l i q u i dc h r o m a t o g r a p h y( H P L C ) m e t h o d w a sd e v e l o p e d t od e t e r m i n ef l o r f e n

11、i c o la c c u m u l a t i o n i nt h es u s c e p t i b l ea n dr e s i s t a n t 置c o l l ．T h ei n v e s t i g a t i o no nt h e i n t e g r o n s g g e n ec a s s e t t e si nt w e n t y - t h i r d 丑c o l ii s o l a

12、 t e sa s s o c i a t e dw i t hc a l f d i a r r h e ai n d i c a t e dt h a t5 7 ％o f t h e mw e r e p o s i t i v ef o r i n t l l g e n e ．S e q u e n c i n ga n a l y s i sr e v e a l e ds i xg e n ec a s s e t t e

13、sp r e v a i l e d ，w h i c he n c o d e d r e s i s t a n c et ot r l m e t h o p r i m ( a p A l ，咖0 J 7 ) ，a m i n o g l y c o s i d e s( a a d B , a a d A la n d a a d A D a n dc h l o r a m p h e n i c o l ( e m l A

14、 ) , r e s p e c t i v e l y ．O ft h e m ，t h e g e n ec a s s e t t ea r r a y sd f r A l 一。礦( 4 5 ％) a n da a d B - o r f - e m L 4 ( 3 2 ％) w e r ef o u n dm o s tp r e v a l e n ta m o n g t h e s ei s o l a t e s ，T

15、 h eg e n ec a s s e t t ea r r a y sa a d B - a a d A l 一c m l d w a sf i r s t l yr e p o r t e dt o o u rk n o w l e d g e ．T h e s ed a t ar e v e a l e dt h eh i g hp r e v a l e n c eo f c l a s sI i n t e g r o n

16、sa m o n g c a l f p a t h o g e n i cE s c h e r i c h i ac o l ii s o l a t e si nB e i j i n gs u r r o u n d i n gr e g i o n i nC h i n a , w h i c hm a yp r o v i d e s o m ei m p o r t a n t u s e f u ls u r v e i

17、 l l a n c e i n f o r m a t i o nr e f l e c t i n gt h ea n t i b i o t i cs e l e c t i v ep r a s s u r e i nt h i ss p e c i f i c r e g i o n ．T h e i n v e s t i g a t i o n o f t h e a n t i m i c r o b i a l s [

18、 把e t r u l n o ft w e n t y - t h r e e E s c h e r i c h i ae o l i i s o l a t e s a n da n a l y s i so f t h ec l a s sl i n t e g r o r d c 鰱s e t t e i nt w e n t y - t h r e eE s c h e r i e h i ae o l ii s o l a

19、 t e sf o u n d t h a tw e t h e rt h ei s o l a t e s c a r r i e d t h e i n t e g r o n ／c a s s t t t e w a sc l o s e l y r e l a t e d t ot h ea n t i m i c r o b i a ls p e c t r u m o f b a c t e r i a li s o l “

20、記s ．T h e i s o l a t e sw h o s e r e s i s t e n c tr a t e sw e r en o t h i 曲n e a r l y d i d n ’t c a r r yt h ec l a s sI i n t e g r o n ．T h ei s o l a t e sc a r r y i n gt h ec l a s s I i n t e g r o nw e r e

21、 a l lr e s i s t a n c tt 0t h es u l f o n a m i d e sa n dm o s t o f t h e m w e r et or e s i s t a n tt o t r i m e t h o p r i m ，s t r e p t o m y c i na n d ／o rs p e c t i n o m y c i na n de h l o m m p h e n

22、k 0 1 ．W h i l e ，t h e r e s i s t a n tp h e n t y p eo f t h e b a c t e r i a li s o l a t e s t ot i mf l u o r o q u i n o l o n e s ，t e t r a c y c l i n e , ，a n dp h e n i c i l l i n sw a s r l ’ts t r o n g l

23、 yc o r r e l a t e dw h e t h e r t h e b a c t e r i a li s o l a t e sc a r r i e dt h ec l a s sI i n t e g r o n ．T h r e e f l o R g e n e sw e r u c l o n e df r o mc a l f p a t h o g e n i cf l o r f e n i e o l

24、 - r e s i s t a n c eE c o i ls t r a i n s ．T h e f l o Rg e n e sr e s u l t e di n a1 3 5 6 - b p f r a g m e n tc o v e r i n gt h eO R F i nr e g i o n6 6 ·1 2 8 0c o d i n g f o r4 0 4a m i n o a c i d s ．N u

25、 c l e o t i d es e q u e n c ea l i g n m e n t w i t ho t h e r p u b l i s h e d f l o Rg e n eS e q u e n c e s f r o mG e n B a n k i s o l a t e df r o mE s e h e r i c h i a c o l i s t r a i n s r e v e a l e d t

26、 h a t s e v e r a l n u c l e o t i d e r e s i d u e s u b s t i t u t i o n s w e r e o b s e r v e d ( f o ri n s t a n c e ，a t s i t e s2 6 ，1 0 5 ，1 7 5 ' 4 3 9 ，4 4 1 ，6 7 1 ，6 7 8 ，7 9 8 ，9 4 3a n d1 0 7 0 )