多重耐藥大腸桿菌與整合子-基因盒系統(tǒng)的研究.pdf

1、東北農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文多重耐藥大腸桿菌與整合子基因盒系統(tǒng)的研究姓名：丁良君申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：張秀英20070620東北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)博士學(xué)位論文大小的整合子基因盒插入?yún)^(qū)片段。只有豬源耐藥菌單帶1009bp大小與豬源耐藥菌雙帶中1009bp大小片段所含基因盒不同，其余相近大小的整合予基因盒插入?yún)^(qū)所含基因盒都相同。3整合子DNA經(jīng)測(cè)序BLAsT分析可知，1009bp整合子可變區(qū)含有aadA23b基因盒，或含有aad

2、A2基因盒；1319bp整合子可變區(qū)含有arr一3、dfrl6基因盒；1664bp的整合子可變區(qū)含有dfrl7、aadA5基因盒；1991bp整合子可變區(qū)含有dhfrXII、aadA2基因盒及orfF開(kāi)放閱讀框72449bp整合子可變區(qū)含有dfrAl、satl、aadAl基因盒及orfX開(kāi)放閱讀框；所有整合子所含基因盒的結(jié)構(gòu)共有6種，包括10種各不相同的基因盒和2種功能不明的開(kāi)放閱讀框4利用地高辛標(biāo)記制備了Int、Intl、IntII三

3、種核酸探針，他們的顯色敏感度為2pg，三種探針不與金黃色葡萄球菌ATOe—sDNA、銅綠假單孢菌ATGc2，。DNA、及正常鼠肺組織DNA顯色，探針特異性較好。Southern雜交顯示三種探針檢測(cè)整合酶基因與PCR方法的符合率為100％。地高辛標(biāo)記的Int、IntI、IntII核酸探針，能有效地檢測(cè)多重耐藥大腸桿菌中整合酶的類型。與斑點(diǎn)雜交相比。菌落原位雜交檢測(cè)整合酶來(lái)確定細(xì)菌中是否含有整合子，更適合養(yǎng)殖場(chǎng)大量菌株整合子類型的確定。51

4、71株擴(kuò)增出整合子的多重耐藥大腸桿菌經(jīng)ERIC—PCR分子生物學(xué)基因分型顯示可分為7個(gè)型別，每個(gè)型別ERICPCR條帶的類型相同?？傊?，本研究采用PCR方法調(diào)查了哈市周邊地區(qū)養(yǎng)殖場(chǎng)整合子所含基因盒的種類，對(duì)含有整合子的多重耐藥大腸桿菌進(jìn)行了流行病學(xué)分型，制備了核酸探針，為l臨床大腸桿菌中整合子的監(jiān)測(cè)建立了～種方便、準(zhǔn)確的菌落原位雜交方法，也為進(jìn)～步從基因水平探討大腸桿菌多重耐藥性的產(chǎn)生奠定了基礎(chǔ)，整合子不僅與大腸桿菌多重耐藥性有關(guān)，而且