五指山原始林區(qū)土壤稀有放線菌的初步調(diào)查.pdf

1、五指山位于海南島中部,北緯18°45'20"～18°58'54",東經(jīng)109°39'38"～109°47'50",主峰位于五指山市境內(nèi),最高峰海拔高度1867米,屬國家自然保護區(qū)的面積134.4平方公里,為海南最大的自然保護區(qū),是世界上現(xiàn)存地勢最高的原始熱帶雨林之一,蘊藏著極其豐富的稀有放線菌資源,至今仍然未開發(fā)利用。我們對五指山原始林區(qū)不同海拔高度和不同植被生境的土壤樣品的稀有放線菌進行了分離、初步鑒定及以香蕉枯萎鐮刀菌4號小種(Fu

2、saium oxysporum f.sp.cubense race4)為對象進行了抑菌效果初步評價,旨在發(fā)現(xiàn)稀有放線菌新屬、新種,獲得對香蕉枯萎鐮刀菌病害具良好抑菌效果的稀有放線菌菌株。初步研究結果如下:
　　 一、采用稀釋平板法,主要選取HV、葡萄糖天門冬素、甘油天門冬素和土壤浸汁四種選擇性培養(yǎng)基(每種培養(yǎng)基上均含有20mg/L的制霉菌素、20mg/L放線菌酮及50mg/L的重鉻酸鉀),結合苯酚、SDS、干熱和超聲波四種不同的

3、預處理方法,共從五指山原始林區(qū)不同海拔高度不同生境的116份土樣中分離得到702株稀有放線菌,其中以苯酚預處理后再涂布于HV瓊脂上分離得到的稀有放線菌最多。
　　 二、對不同海拔高度分離到的稀有放線菌數(shù)量進行統(tǒng)計分析,發(fā)現(xiàn)稀有放線菌的數(shù)量隨海拔高度的升高而降低;同時我們還發(fā)現(xiàn)不同生境樣品中分離得到的稀有放線菌的數(shù)量也是不一樣的。
　　 三、根據(jù)氣生菌絲有無、菌落的顏色、生長及形態(tài)的觀察,產(chǎn)水溶性色素的情況等,將702株稀

4、有放線菌劃分為14個類群。
　　 四、從上述14個類群中挑選26株稀有放線菌進行了形態(tài)觀察和16S rRNA基因序列分析,結果顯示此26株菌分別為小單孢菌屬,冢村菌屬,小雙孢菌屬,指孢囊菌屬,野村菌屬,游動四孢屬,Luedemannella及Streptosporangiaceae str.,其中以小單孢菌屬為主。
　　 五、以香蕉枯萎病菌4號小種為抑制對象,對702株稀有放線菌進行抑菌活性初步測定和篩選,發(fā)現(xiàn)菌株210

5、-1-61具有較強的拮抗活性,抑菌距離達8.2mm。
　　 六、對拮抗菌210-1-61進行鑒定,通過形態(tài)特征及16S rDNA序列分析,再通過生理生化等多項特征與相關近緣種屬比較,我們將其鑒定為小單孢菌屬,與Micromonosporapattaloongensis JCM12833T親緣關系最近。
　　 七、對菌株119-1-07的進行初步鑒定,發(fā)現(xiàn)其形態(tài)特征與Luedemannella,flava7-40(26)T