五指山放線菌分離菌株活性測定及WZ254菌株產(chǎn)生的抗生素分離純化.pdf

1、辣椒疫霉和香蕉枯萎鐮刀菌4號小種是熱帶地區(qū)重要的植物土傳病害病原菌，目前尚無有效的生物農(nóng)藥進行防治。五指山是海南最大的國家自然保護區(qū)，也是世界上現(xiàn)存地勢最高的原始熱帶雨林之一，蘊藏著極其豐富的放線菌資源。本研究從前期分離獲得的1261株放線菌中隨機挑選了511株放線菌進行了抗辣椒疫霉菌和香蕉枯萎病菌的活性評價，并從中挑選出1株對辣椒疫霉和香蕉枯萎病均有較高拮抗活性的菌株WZ254進行了抗生素的分離純化，其主要研究結(jié)果如下： 一、

2、以香蕉枯萎病菌4號小種和辣椒疫霉菌為抑制對象，通過平板對峙培養(yǎng)法對511株放線菌的抑菌活性進行了初步測定，篩選出對辣椒疫霉菌具強抑菌活性的菌株8株：WZ41、WZ159、WZ184、WZ254、WZ391、WZ420、WZ423和WZ428，其抑菌距離分別是18mm、18mm、16mm、20mm、16mm、17mm、18mm、17mm，具較強抑菌活性的菌株6株：WZ142、WZ149、WZ227、WZ232、WZ235、WZ258、WZ

3、342、WZ349、WZ396、WZ411，其抑菌距離分別是12mm、11mm、13mm、12mm、13mm、13.5mm、10mm、14mm、11mm、10mm；篩選出對香蕉枯萎病菌4號小種具較強抑菌活性的菌株4株：WZ235、WZ254、WZ342、WZ423，其抑菌距離分別是13.5mm、13mm、11mm、10.5mm。 二、對篩選出的對辣椒疫霉菌和香蕉枯萎病菌有活性放線菌在五指山的分布進行初步統(tǒng)計分析，發(fā)現(xiàn)對兩種病菌均

4、有活性的放線菌約有2/3都分布在樣路線Ⅲ的土壤樣本中(沿著山路，在山路的兩邊約10～20m處采樣)，且對辣椒疫霉有活性的放線菌約有1/2分布在海拔高度1000m以下，對香蕉枯萎病菌有活性的放線菌約有1/2分布在海拔高度1000m以下。 三、選取對辣椒疫霉菌和香蕉枯萎病菌都有強抑菌活性的WZ254菌株進行了抗生素的分離純化。WZ254發(fā)酵液上清發(fā)酵液經(jīng)減壓濃縮后得到的粘稠膏狀物，為黑褐色，糖漿味，經(jīng)乙酸乙酯萃取后，其水相和脂相均對

5、辣椒疫霉病菌有活性，但對香蕉枯萎病菌均沒有活性。經(jīng)硅膠層析和結(jié)晶法相結(jié)合分離獲得了一個主成分純化合物，經(jīng)與標(biāo)準(zhǔn)品進行TLC對照，與已知抗生素-豐加霉素一致，取1mg稀釋成1mg/mL的濃度做辣椒疫霉病菌的抑菌活性，對辣椒疫霉具有極強的抑菌活性。 四、對WZ254菌株進行了形態(tài)觀察，WZ254的氣生菌絲體灰白色，基內(nèi)菌絲體無色，孢子絲呈開螺旋卷曲。 五、對WZ254菌株的生理生化特征測定，結(jié)果表明，WZ254菌株能產(chǎn)生蛋白

6、酶使明膠液化；能使硝酸鹽還原；能產(chǎn)生淀粉酶使淀粉水解；能利用尿素：不產(chǎn)生纖維素酶；不產(chǎn)生H2S；不能產(chǎn)生凝乳酶使脫脂牛奶凝固，而產(chǎn)生蛋白酶使脫脂牛奶胨化；不能在酪氨酸培養(yǎng)基上產(chǎn)生黑色素。 六、對WZ254菌株進行了16SrDNA測序分析。結(jié)果表明，WZ254菌株與鏈霉菌屬的系列一致性達99％，說明WZ254菌株屬于鏈霉菌屬。根據(jù)WZ254菌株的形態(tài)特征、生理生化特性和16SrDNA測序分析結(jié)果，WZ254菌株與白刺鏈霉菌和原絳紅