北沙參SRAP體系的建立優(yōu)化及栽培群體遺傳多樣性研究.pdf

1、北沙參為多年生草本植物，在栽培群體中存在著豐富的遺傳變異。在生產(chǎn)和使用上人們根據(jù)其葉片形狀、葉柄顏色、根條粗壯程度等將北沙參劃分為:大紅袍、白條參、紅條參三個栽培品種。關(guān)于它們之間在分子水平上的遺傳關(guān)系研究較少，而且在長期的栽培過程中，由于不注意品種的保護和相關(guān)育種工作的滯后，各品種混雜退化嚴重。本研究將SRAP這種新的DNA分子標(biāo)記運用到北沙參遺傳多樣性的研究上，以期在分子水平上明確各品種間的親緣關(guān)系，為北沙參品種的提純和科學(xué)利用提供

2、依據(jù)。
　　 試驗以萊陽北沙參為材料，首先按照傳統(tǒng)分類方式劃分品系，提取了北沙參基因組DNA;同時建立優(yōu)化了北沙參SRAP分子標(biāo)記體系，并將該技術(shù)體系應(yīng)用于83個北沙參材料的SRAP擴增分析中。試驗具體結(jié)果如下:
　　 1、按照傳統(tǒng)分類方法，將所采集北沙參群體樣本劃分為白條參、紅條參、大紅袍、花參四大類，并按類群編號。
　　 2、采用改良CTAB法提取北沙參基因組DNA，并對所提取的DNA進行了純化處理。純化后的

3、DNA條帶明亮整齊，無拖尾顯現(xiàn)，質(zhì)量高。提取的DNA經(jīng)過進一步純化后，有效的解決了北沙參基因組DNA多酚、蛋白質(zhì)、多糖等雜質(zhì)含量高的問題，使的該DNA模板更加適合SRAP標(biāo)記分析。
　　 3、建立并優(yōu)化了適用于北沙參基因組DNA標(biāo)記分析的SRAP技術(shù)體系。
　　 試驗以北沙參DNA為模板，通過DNA、dNTPs、Mg2+、Primer、Taq polymerase的濃度梯度試驗，對北沙參SRAP反應(yīng)體系進行了優(yōu)化，建立了

4、穩(wěn)定可靠的北沙參SRAP-PCR反應(yīng)體系;反應(yīng)體系20μL: DNA80ng、 Mg2+2.5mmol/L、dNTPs0.25mmol/L、Taq polymerase 1U、正反向Primer均為0.1μmol/L。
　　 所確定的SRAP反應(yīng)程序為:94℃預(yù)變性5min;94℃變性1min、35℃復(fù)性1min、72℃延伸1min，5個循環(huán);94℃變性1min、50℃復(fù)性1min、72℃延伸1min，35個循環(huán)，72℃延伸10

5、min，10℃保存。
　　 4、引物的篩選及北沙參基因組DNA的SRAP擴增
　　 利用已經(jīng)優(yōu)化好的體系，從240對引物中篩選出條帶清晰，穩(wěn)定性、多態(tài)性好的引物24對，共擴增出114條清晰帶，平均4.75條;其中多態(tài)性條帶77條，平均每對引物擴增出3.21條多態(tài)性條帶，多態(tài)性比率為67.5％。
　　 利用所篩選出的引物對83個北沙參DNA模板進行SRAP擴增，得到了穩(wěn)定的SRAP擴增條帶，這些條帶反應(yīng)出了各樣本基