基于ISSR和SRAP的半夏種質(zhì)資源遺傳多樣性研究.pdf

1、目的：
　　 利用ISSR和SRAP分子標記技術(shù)評價全國不同產(chǎn)地和表型的半夏居群種質(zhì)資源和親緣關(guān)系，為正確的保護和利用半夏種質(zhì)資源及對篩選抗倒伏、抗病能力強的品種和解決栽培品種種質(zhì)退化的問題提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 1提取半夏標本總DNA。
　　 2將36個不同產(chǎn)地和表型的半夏居群分別配成不同表型半夏基因池、不同產(chǎn)地基因池和不同產(chǎn)地和表型的半夏基因池。
　　 3 ISSR分析：對80條I

2、SSR引物進行初選，然后用其中適合的8個ISSR引物進行ISSR分析。
　　 4 SRAP分析：①采用正交設計和綜合評分法對半夏SRAP-PCR反應條件進行優(yōu)化；②對100對SRAP引物進行初選，然后用其中適合的14對SRAP引物進行SRAP分析。
　　 結(jié)果：
　　 1 ISSR分析：①不同表型半夏ISSR聚類分析：用8個ISSR引物擴增8個不同表型半夏和掌葉半夏，共擴增出106條帶，其中87條具有多態(tài)性，多態(tài)

3、位點百分率為82.1％。各引物擴增的條帶數(shù)為11-17條，平均擴增條帶數(shù)為13.3條。除引物UBC8808和UBC820外，其余6個引物均能擴增出掌葉半夏的特征性條帶，共計18條。8種表型半夏種內(nèi)共擴增出88條帶，其中55條具有多態(tài)性，多態(tài)位點百分率為62.5％。各引物擴增的條帶數(shù)為9-14條，平均擴增條帶數(shù)為6.9條。從Jaccard相似系數(shù)矩陣中可知各表型半夏間的相似系數(shù)在0.447-0.833之間，掌葉半夏與各表型半夏的相似系數(shù)均

4、在0.372以下，遠低于各表型半夏間的相似系數(shù)。②不同產(chǎn)地半夏ISSR聚類分析：用8個ISSR引物擴增13個不同產(chǎn)地半夏，共擴增出83條帶，其中65條具有多態(tài)性，多態(tài)位點百分率為78.3％。各引物擴增的條帶數(shù)為7-16條，平均擴增條帶數(shù)為10.4條。從聚類圖上可看出不同產(chǎn)地半夏可分為湖北省內(nèi)與省外兩支。③不同產(chǎn)地及不同表型半夏ISSR聚類分析：用8個ISSR引物擴增35個不同產(chǎn)地及表型的半夏，共擴增出104條帶，其中97條具有多態(tài)性，多

5、態(tài)位點百分率為93.3％。各引物擴增的條帶數(shù)為8-20條，平均擴增條帶數(shù)為13.0條。2 SRAP分析：①優(yōu)化反應體系結(jié)果為：25μL反應體系中含有1× buffer、Taq酶1.0U、Mg2+2.5mmol·L-1、dNTPs0.1 mmol/L-1、模板DNA50ng、引物0.8μmol/L-1。②不同表型半夏SRAP聚類分析：用14對SRAP引物擴增8個不同表型半夏和掌葉半夏，共擴增出259條帶，其中168條具有多態(tài)性，多態(tài)位點百

6、分率為64.9％。各引物擴增的條帶數(shù)為10-29條，平均擴增條帶數(shù)為18.5條。除引物Me27+Em13外，其余6個引物均能擴增出掌葉半夏的特征性條帶，共計36條。8種表型半夏種內(nèi)共擴增出224條帶，其中53條具有多態(tài)性，多態(tài)位點百分率為23.7％。各引物擴增的條帶數(shù)為10-28條，平均擴增條帶數(shù)為3.8條。從Jaccard相似系數(shù)矩陣中可知各表型半夏間的相似系數(shù)在0.779-0.994之間，掌葉半夏與各表型半夏的相似系數(shù)均在0.450

7、以下，遠低于各表型半夏間的相似系數(shù)。③不同產(chǎn)地半夏SRAP聚類分析：用14對SRAP引物擴增13個不同產(chǎn)地半夏，共擴增出237條帶，其中33條具有多態(tài)性，多態(tài)位點百分率為13.9％。各引物擴增的條帶數(shù)為12-29條，平均擴增條帶數(shù)為16.9條。④不同產(chǎn)地及不同表型半夏SRAP聚類分析：對35個不同產(chǎn)地及表型的半夏進行SRAP擴增，共擴增出171條帶，其中27條具有多態(tài)性，多態(tài)位點百分率為15.8％。各引物擴增的條帶數(shù)為9-19條，平均擴

8、增條帶數(shù)為13.2條。
　　 結(jié)論：
　　 1 ISSR分析：①半夏ISSR帶型表現(xiàn)出很高的多態(tài)性，而且可重復性較好，說明該ISSR分子標記是評估半夏遺傳多樣性的有效方法。②從聚類圖上可區(qū)分不同表型和不同產(chǎn)地的半夏，產(chǎn)地往往先于表型聚類在一起。2 SRAP分析：①SRAP分子標記是評估半夏遺傳多樣性的有效方法。②從聚類圖上可區(qū)分不同表型和不同產(chǎn)地的半夏，產(chǎn)地往往先于表型聚類在一起。
　　 3 ISSR技術(shù)和SRA