禽畜用高效復(fù)合微生態(tài)制劑的研發(fā).pdf

1、微生態(tài)制劑是在微生態(tài)學(xué)理論指導(dǎo)下，運(yùn)用微生態(tài)學(xué)原理，利用對(duì)宿主有益無(wú)害且活的正常微生物或正常微生物的促生長(zhǎng)物質(zhì)，及特殊工藝制成的制劑。其應(yīng)用前景廣闊，在防止腸道疾病方面不僅安全無(wú)害、無(wú)殘留、不產(chǎn)生抗藥性，還有提高飼料利用率、促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)、改善產(chǎn)品品質(zhì)等作用。目前對(duì)微生態(tài)制劑的研究越來(lái)越多，其顯著效果吸引了許多專家的注意，很多廠家公司也投入了大量的物力人力財(cái)力來(lái)充分挖掘其對(duì)畜牧養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的潛力。但與發(fā)達(dá)國(guó)家相比還有較大差距。因此展開(kāi)微生態(tài)

2、制劑的選育和生物技術(shù)的研究，提高國(guó)內(nèi)生產(chǎn)技術(shù)，縮短與發(fā)達(dá)國(guó)家間的差距，就顯得非常重要和緊迫。
　　 本文在已有的水產(chǎn)養(yǎng)殖微生態(tài)制劑EM菌的基礎(chǔ)上，從本室已有或購(gòu)得的微生態(tài)菌種(納豆芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、蠟樣芽孢桿、枯草芽孢桿菌、米曲霉、釀酒酵母)出發(fā)，采用亞硝基胍-紫外線、甲磺酸乙酯-紫外線、亞硝基胍-甲磺酸乙酯-紫外線等多種不同復(fù)合誘變方法對(duì)出發(fā)菌株進(jìn)行誘變，在不同pH梯度和含有不同濃度膽鹽的抗性培養(yǎng)基上篩選獲得適合禽畜胃和

3、腸道環(huán)境的耐酸、耐膽鹽菌種(耐pH3.5、耐膽酸鹽0.1％～0.2％)，以補(bǔ)充原來(lái)EM菌中缺乏的微生物，擴(kuò)大其微生物種類，使其達(dá)到國(guó)內(nèi)外先進(jìn)水平。
　　 利用單次單因子法、Plackett-Burman法等現(xiàn)代生物過(guò)程優(yōu)化技術(shù)，建立不同種類微生物為優(yōu)勢(shì)菌的培養(yǎng)基組分和培養(yǎng)條件。分別確定了各菌種單獨(dú)培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)條件，EM菌最佳培養(yǎng)基為酵母膏3.13％、葡萄糖1.5％、NaAc0.63％、KH2PO40.2％、MgSO40.05％

4、、MnSO40.025％、pH6.0。同時(shí)優(yōu)化了芽孢桿菌的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，酵母膏0.5％、牛肉膏0.5％、蛋白胨1％、NaCl1％、MnSO40.75％、MgSO40.05％、K2HPO40.2％、KH2PO40.2％、pH8，接種量2％，溶氧50％(50ml/100ml)，此條件下培養(yǎng)48h，B.cereus細(xì)胞濃度達(dá)到8.2×1013cfu/ml，芽孢率97.5％，B.natto細(xì)胞濃度達(dá)到9.5×1013cfu/ml，芽孢率92

5、.6％，B.licheniformis細(xì)胞濃度達(dá)到2.4×1013cfu/ml，芽孢率90％，B.subtilis細(xì)胞濃度達(dá)到8.6×1012cfu/ml，芽孢率88％。
　　 研究了以上各微生物菌種(豆芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、蠟樣芽孢桿、枯草芽孢桿菌、米曲霉、釀酒酵母、灰色鏈霉菌、屎腸球菌)之間的拮抗性，發(fā)現(xiàn)各菌種間不存在拮抗性，可進(jìn)行下一步混合培養(yǎng)。
　　 在上一步研究的基礎(chǔ)上，根據(jù)菌種生長(zhǎng)速度、溫度、溶氧、pH等條

6、件確定不同微生物的接種比列，混合培養(yǎng)。并以各菌種(1％接種量)純培養(yǎng)為對(duì)照，開(kāi)展多菌種混合培養(yǎng)的研究。最終確定了以下2種微生態(tài)劑型：微生態(tài)制劑Ⅰ型(厭氧型)：以EM菌為主，輔以釀酒酵母、屎腸球菌、丙酮丁醇梭桿菌，培養(yǎng)后檢測(cè)生物量可達(dá)到6.32×1011；微生態(tài)制劑Ⅱ型(耗氧性)：以芽孢桿菌為主，輔以釀酒酵母、灰色鏈霉菌、米曲霉、屎腸球菌，培養(yǎng)后檢測(cè)其生物量可達(dá)到8.35×1011。
　　 最后研究不同的保護(hù)劑對(duì)微生態(tài)制劑的保質(zhì)期