一株嗜熱菌代謝產(chǎn)物增強(qiáng)鯉魚免疫力活性成分的研究.pdf

1、免疫增強(qiáng)劑又稱免疫促進(jìn)劑是指單獨(dú)或同時(shí)與抗原使用均能增強(qiáng)機(jī)體免疫應(yīng)答的物質(zhì)，它可以提高動(dòng)物機(jī)體的免疫機(jī)能及防病、抗病能力。免疫增強(qiáng)劑多為糖類和蛋白類成分，其來源包括動(dòng)物、植物、微生物。
　　 本研究旨在篩選出具有免疫增強(qiáng)活性的菌株，并對該菌株發(fā)酵液中免疫增強(qiáng)活性成分進(jìn)行分離、純化和鑒定，以期為將其作為免疫增強(qiáng)劑提供依據(jù)。主要試驗(yàn)方法、步驟、結(jié)果如下：
　　 1、以分離自西安某溫泉的7株嗜熱菌為篩選對象，將試驗(yàn)菌株進(jìn)行發(fā)酵

2、培養(yǎng)，離心過濾，所得上清液濃縮制餌后投喂試驗(yàn)鯉，每7d測定一次鯉外周血白細(xì)胞吞噬活性（Leucocyt phagocytic activity）、吞噬細(xì)胞殺菌活性(Phagocyt bactericidal activity)，以確定這7株細(xì)菌代謝產(chǎn)物對鯉是否具有免疫增強(qiáng)效果。試驗(yàn)周期共28d。試驗(yàn)結(jié)果表明：菌株XA-1和菌株XA-4兩組，鯉的以上二項(xiàng)指標(biāo)與對照組相比均有較大程度提高，表現(xiàn)出較強(qiáng)的免疫增強(qiáng)活性(p＜0.05)。而其余各菌

3、株組，在本試驗(yàn)條件下對鯉的免疫功能無顯著增強(qiáng)作用。根據(jù)各組菌株發(fā)酵液免疫增強(qiáng)效果以及菌的生長特性，本試驗(yàn)選取菌株XA-1作為目標(biāo)菌株，并對其進(jìn)行了菌種的生理生化鑒定和分子生物學(xué)鑒定。結(jié)果表明，菌株XA-1隸屬于厭氧芽胞桿菌屬(Anoxybacillus)，種待定。
　　 2、對篩選得到的高活性菌株XA-1進(jìn)行液體發(fā)酵，通過離心、過濾、真空冷凍干燥將發(fā)酵液濃縮后，分別用極性由小至大的4種有機(jī)溶劑（石油醚、乙酸乙酯、氯仿、甲醇）提取

4、所得濃縮物。將各提取物按等濃度等劑量分別注射鯉、并測定其白細(xì)胞吞噬活性、吞噬細(xì)胞殺菌活性、SOD活性、溶菌酶活性。根據(jù)上述4項(xiàng)免疫功能指標(biāo)判定何種有機(jī)溶劑提取物中存在菌株免疫活性成分。結(jié)果表明，菌株免疫活性成分主要存在于甲醇提取物內(nèi)。
　　 3、將第二步所獲得的甲醇提取物浸膏進(jìn)行分離、純化、活性檢測和化學(xué)結(jié)構(gòu)鑒定。通過大孔吸附樹脂濃縮后、采用硅膠柱層析法對其進(jìn)行分離，共獲得683個(gè)流分，后合并為5個(gè)流分組，并得到兩個(gè)較純的晶體化