三株海洋真菌次級代謝產物活性成分的研究.pdf

1、海洋真菌作為海洋微生物中的重要一員，其次級代謝產物化學結構新穎、種類繁多，是新活性先導化合物的重要來源。為了尋找抗腫瘤活性先導化合物，本論文采用活性追蹤的方法開展了1株南極海泥來源的真菌和2株來源于不同海域的海藻真菌中次級代謝產物抗腫瘤活性次級代謝產物研究工作。 從6個海藻樣品中分離得到了21株真菌，采用海蝦生物致死法和MCF7、SF-268、NCI-H460細胞為模型的篩選模型，以細胞周期抑制、細胞凋亡誘導以及壞死性細胞毒為活

2、性指標，結合化學篩選，獲得具有活性且次級代謝產物豐富的活性菌株9株。 采用正相和反相硅膠柱色譜、Sephadex LH-20凝膠柱色譜、半制備反相高壓液相色譜等分離方法，從真菌PRl9N-1(Penicillium sp)中分離得到20個化合物(1-20)，從黃曲霉c-f-3(Aspergillus flavus)中分離得到18個化合物(21-38)，從真菌v-3-1中分離得到了6個化合物(39-44)，共計44個化合物。

3、 采用現(xiàn)代波譜技術(UV、IR、NMR、MS、CD)，并結合其理化性質，闡明了40個化合物的化學結構(化合物結構參見Fig.1)；其中新化合物14個，包括11個艾里莫芬烷型倍半萜(1-6，8-12)，利用NOESY譜、偶合常數確定其相對構型，并根據該類化合物的可能生合成途徑，結合旋光值，推測了該類化合物部分結構的絕對構型；1個新的二酮哌嗪類化合物(21)，利用NOE差譜確定了化合物的相對構型，并通過氨基酸手性分析柱確定了化合物的絕對構

4、型；2個2-吡喃酮類化合物(24、25)。此外還有2個化合物(13、28)為首次從天然來源中分離得到。 另外發(fā)現(xiàn)的其他已知化合物的結構類型主要有甾類(32、33、40、41)，倍半萜類(7，14-16)，苯的簡單衍生物(17、18、19、26)，生物堿類(20、22、23、27、28).2-吡喃酮衍生物(29、30)等。 利用MTT法、SRB法以及流式細胞術結合形態(tài)學檢測的方法，對分離獲得的單體化合物的抗腫瘤活性進行了初

5、步評價。結果表明：新化合物1對A549、HL-60細胞顯示出較強的細胞毒活性；新化合物8對A549顯示較強的活性，對HL-60細胞顯示中等強度的活性；新化合物10對兩種腫瘤細胞都有微弱的活性；新化合物9對A549顯示微弱的活性；新化合物11對HL-60細胞顯示較弱的活性；新化合物21對HL-60細胞顯示微弱的細胞毒活性；化合物28對A549、HL-60及MOLT-4三種腫瘤細胞都顯示出一定的抑制活性。 運用cAMP檢測方法對新化

6、合物24、25的GPR12受體結合活性進行了初步評價，結果顯示化合物24能促進GPR12-CHO、GPR12-HEK293細胞中的cAMP含量增加，且呈一定的劑量依賴關系。 綜上所述，本文采用組合篩選的方法獲得9株海洋活性真菌，并對3株海洋真菌的次級代謝產物的活性部位進行了系統(tǒng)研究，共分離鑒定了40個化合物，其中新化合物14個。其中具有細胞增殖抑制活性的新化合物6個，具有GPR12受體激動活性的新化合物1個。上述研究結果為尋找藥