野生馬蹄金種質(zhì)資源RAPD和SRAP分析及優(yōu)異選系區(qū)域適應(yīng)性研究.pdf

1、采用RAPD和SRAP技術(shù)，對(duì)20份野生馬蹄金(Dichondra.repens)和1份美國(guó)栽培品種(common)進(jìn)行分子水平遺傳多樣性分析，旨在獲得較為完整的遺傳分類及親緣關(guān)系資料，從而為馬蹄金種質(zhì)資源保護(hù)利用、品種選育提供理論依據(jù)。在此基礎(chǔ)上，通過對(duì)我國(guó)西南地區(qū)收集的30余份野生馬蹄金資源綜合評(píng)價(jià)，篩選出1份坪用價(jià)值較為優(yōu)良的野生馬蹄金材料貴州三都(GD200503)，并以美國(guó)進(jìn)口品種(common)為對(duì)照進(jìn)行區(qū)域適應(yīng)性評(píng)價(jià)。主要

2、研究結(jié)果如下：
　　 (1)借鑒其它植物的研究方法和研究成果，采用正變?cè)囼?yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化RAPD和SRAP的擴(kuò)增體系，探索出一套適合于分析馬蹄金種質(zhì)資源RAPD和SRAP的反應(yīng)體系。
　　 (2)運(yùn)用RAPD標(biāo)記對(duì)21份馬蹄金種質(zhì)資源遺傳多樣性進(jìn)行研究，篩選出的20個(gè)引物擴(kuò)增出189條標(biāo)記帶，其中多態(tài)性條帶130條，多態(tài)性比率為68.78％，擴(kuò)增條帶變幅6-13條，每個(gè)隨機(jī)引物平均1產(chǎn)生6.5條多態(tài)性條帶，GS值的變化范圍為0

3、.323-0.984，GS平均值為0.665。表明馬蹄金種質(zhì)資源具有較高的遺傳多樣性。聚類分析可將21份材料分為2大類，來自相同地理環(huán)境的馬蹄金大部分能聚在一類，劃分類群同形態(tài)特征與地理分布有一定關(guān)系，說明馬蹄金的遺傳變異與地理環(huán)境的影響有較為密切的聯(lián)系。分析同時(shí)表明盡管RAPD存在重復(fù)性差的特點(diǎn)，但仍然可應(yīng)用于馬蹄金等遺傳多樣性研究水平較淺的物種或?qū)嶒?yàn)室精度要求不太高的分子遺傳標(biāo)記研究。
　　 (3)應(yīng)用SRAP標(biāo)記對(duì)21份野

4、生馬蹄金遺傳多樣性進(jìn)行檢測(cè)，從80對(duì)SRAP引物中篩選出能擴(kuò)增出清晰多態(tài)性條帶的引物19對(duì)，共擴(kuò)增出212條SRAP標(biāo)記帶，其中156條帶具有多態(tài)性，多態(tài)性比率為73.58％，擴(kuò)增條帶變幅7-17條，每對(duì)引物平均擴(kuò)增出8.2條多態(tài)性條帶，GS變化范圍為0.444-0.980，平均值為0.711。運(yùn)用SRAP標(biāo)記能夠揭示西南地區(qū)野生馬蹄金較大的遺傳多樣性。聚類分析可將21份材料分為3大類，劃分類群同形態(tài)特征與地理分布也有一定關(guān)系，同時(shí)也說

5、明本試驗(yàn)所用的種質(zhì)具有一定的代表性的，揭示了我國(guó)西南地區(qū)馬蹄金材料間的遺傳多樣性與親緣關(guān)系。
　　 (4)將RAPD、SRAP的遺傳相似系數(shù)矩陣進(jìn)行相關(guān)分析，RAPD和SRAP相關(guān)系數(shù)r0.01=0.930，二者存在極顯著正相關(guān)性，說明優(yōu)化后的RAPD和SRAP技術(shù)較為穩(wěn)定，盡管兩種聚類方法在個(gè)別材料分類上存在差異，但應(yīng)用于馬蹄金遺傳多樣性與親緣關(guān)系分析具有較高的一致性和可信度。
　　 (5)基于RAPD和SRAP混合數(shù)

6、據(jù)估計(jì)馬蹄金的遺傳相似系數(shù)結(jié)果，21份馬蹄金材料之間的GS值在0.426-0.969，平均值為0.689，處于RAPD和SRAP之間。由供試材料的RAPD和SRAP數(shù)據(jù)混合后的相似系數(shù)聚類分析所得聚類圖，可將21份馬蹄金材料分為兩大類。
　　 (6)2009-2010年，通過測(cè)定各材料4個(gè)地區(qū)坪用性狀可以看出，野生馬蹄金GD200503綠期長(zhǎng)、成坪速度較快、均一性好、抗逆性強(qiáng)，坪用特性較為優(yōu)異。在雅安、洪雅2個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)GD2005

7、03綠色期長(zhǎng)達(dá)320天以上，除溫江點(diǎn)外，其他3個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)野生馬蹄金GD200503的綠期都比CK長(zhǎng)；GD200503成坪天數(shù)最短55天，最長(zhǎng)60天，較對(duì)照品種CK快3-9天；葉面積0.57-0.66cm2，小于對(duì)照品種0.38-0.96cm2;GD200503材料葉色淺綠，CK葉色綠；4個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)GD200503的草層高度都低于對(duì)照品種CK。從葉面積、葉色、均一性、草層高度、皺褶、抗逆性、成坪速度和綠期等12方面綜合分析，GD200503材

8、料在2009-2010年區(qū)域試驗(yàn)中綜合表現(xiàn)良好。
　　 綜上所述，野生馬蹄金種質(zhì)資源在DNA分子水平的遺傳多樣性較為豐富，其遺傳變異與地理分布、形態(tài)特征有一定相關(guān)性。其中基于RAPD和SRAP分析得到的野生材料GD200503與美國(guó)品種遺傳相似系數(shù)分別為0.397和0.527，遺傳距離較遠(yuǎn)，在區(qū)域試驗(yàn)中這兩份材料形態(tài)指標(biāo)和抗性指標(biāo)也存在較大差異，由此可見，野生材料GD200503在遺傳基礎(chǔ)和形態(tài)上都區(qū)別于栽培品種，具有較高研究潛