晉、魯、豫三省雞桿菌感染情況調查及RAPD分型方法的建立與應用.pdf

1、雞輸卵管囊腫是困擾我國蛋雞生產的重要疾病之一。該病主要侵害產蛋雞群的呼吸道和生殖道,臨床上以母雞產蛋數(shù)量和質量下降、產蛋高峰缺失、蛋殼變形、輸卵管炎,并最終因導致輸卵管囊腫而表現(xiàn)“企鵝”狀大腹雞為主要特征。鴨源雞桿菌(Gallibacteriumanatis)與本病的發(fā)生有關。
　　 利用雞桿菌微量乳膠凝集試驗對我國河南、山東、山西等不同地區(qū)86家臨床健康蛋雞場1314份血清樣品和河南省12家發(fā)病雞場384份血清樣品進行了血清學

2、檢測,對雞桿菌的感染情況進行了調查。結果表明:我國部分地區(qū)存在雞桿菌感染,86個雞場雞桿菌感染率為44.37％(583/1314),雞桿菌血清Ⅰ型感染率為11.80％(155/1314),Ⅱ型感染率為22.98％(302/1314),Ⅳ型感染率為9.60％(126/1314):12個發(fā)病雞場雞桿菌感染率為48.4％(186/384),雞桿菌血清Ⅰ型感染率為4.4％(17/384),Ⅱ型感染率為21.4％(82/384),Ⅳ型感染率為37

3、.5％(144/384)。結果表明:目前該病在我國部分地區(qū)已經存在雞桿菌感染和流行,不同品種和日齡的雞均可發(fā)生,但不同地區(qū)雞桿菌感染率存在顯著差異,峪口和青腳麻雞的血清感染率比良鳳花和三黃麻雞的血清感染率高,開產前蛋雞的血清感染率低于開產后的血清感染率。
　　 以9株雞桿菌中國分離株為研究對象,根據(jù)GenBank上登錄的相關序列,針對雞桿菌三個管家基因rpoB,、infB和atpD設計引物并進行PCR擴增、克隆和序列測定分析。擴

4、增出三個管家基因rpoB、infB和atpD基因部分片段,核苷酸序列長度分別為566bp、531bp、1441bp,測序結果已登陸到GenBank。將9株雞桿菌中國分離株的三個管家基因部分核苷酸序列與已知的雞桿菌屬和巴氏桿菌科其它屬相關參考株的相應基因序列比較分析并構建進化樹。結果表明:雞桿菌中國分離株間的核苷酸同源性為98.1％～100％,雞桿菌中國分離株與國外雞桿菌分離株間的同源性為89.2～97.1％,雞桿菌中國分離株與巴氏桿菌科

5、其它屬參考株間的同源性為82.1％～83.5％；進化樹共形成三大分支,分別為雞桿菌中國分離株分支、國外雞桿菌分離株分支和巴氏桿菌科其它屬分離株分支。雞桿菌中國分離株間的親緣關系較近,國內雞桿菌與國外雞桿菌間的親緣關系較遠。
　　 對9株雞桿菌中國分離株進行了血清分型,并應用8條隨機引物對該9株雞桿菌中國分離株和3個參考菌株(1株巴氏桿菌、1株大腸桿菌和1株鏈球菌)共12株細菌做隨機擴增多態(tài)性DNA(RAPD)分型研究。結果表明,

6、9株雞桿菌中國分離株分別屬于血清Ⅰ型(1/9)、血清Ⅱ型(3/9)和血清Ⅳ型(5/9)。所用8條隨機引物中有3條呈現(xiàn)良好的多態(tài)性和穩(wěn)定性,可產生差異顯著的指紋圖譜。采用SPSS13.0軟件分析了不同菌株間的遺傳距離,并依此繪制出菌株間的親緣關系樹狀圖。12株細菌共分為4個聚類群,其中9株雞桿菌中國分離株位于同一聚類群中,且又可分為4個聚類亞群。3個參考菌株各自形成一個獨立的聚類群。不同血清型的雞桿菌菌株具有相似的指紋圖,同一血清型的菌株