A型副雞嗜血桿菌單克隆抗體的制備及夾心ELISA診斷方法的初步建立.pdf

1、副雞嗜血桿菌是雞傳染性鼻炎(IC)的病原菌，該菌培養(yǎng)條件苛刻、分離和生化鑒定困難，發(fā)病雞病癥不典型，病程緩慢，加大了臨床診斷和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的難度。本研究旨在研制出該細(xì)菌種特異性單抗，并在此基礎(chǔ)上建立起特異性較強(qiáng)、敏感性較好的檢測(cè)方法。 本研究以副雞嗜血桿菌A型標(biāo)準(zhǔn)株083菌株經(jīng)0.01％硫柳汞滅活后作為抗原，4次免疫8周齡BALB/c小鼠后，取小鼠脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞SP2/0-Ag-14進(jìn)行融合。通過(guò)間接ELISA和直接平板凝集試

2、驗(yàn)進(jìn)行篩選，將獲得的陽(yáng)性細(xì)胞株進(jìn)行亞克隆，篩選穩(wěn)定分泌單克隆抗體的細(xì)胞株。經(jīng)5次亞克隆后共獲得6株針對(duì)A型副雞嗜血桿菌特異性單抗，其中5株是通過(guò)Page氏抗原制備方法免疫小鼠制得的，分別命名為1D5、3F5、483、4F5和4G2；1株是通過(guò)Kume氏改進(jìn)法制取抗原后免疫小鼠制得的，命名為2-7B。以上單抗腹水的間接ELISA效價(jià)在105～4×106之間，直接平板凝集試驗(yàn)效價(jià)在23～25。免疫球蛋白亞類試劑盒鑒定結(jié)果表明：4F5和2-7

3、B屬于IgG1亞類，3F5、4B3和4G2屬于IgG3亞類，1D5為IgM亞類。 特異性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：該6株單抗只與A型副雞嗜血桿菌反應(yīng)，而不與巴氏桿菌、禽嗜血桿菌、放線桿菌發(fā)生交叉反應(yīng)，顯示出很好的種特異性，同時(shí)也不與其它B、C型副雞嗜血桿菌反應(yīng)，表現(xiàn)出一定的型特異性；而與A型的其它副雞嗜血桿菌有交叉反應(yīng)，顯示出較好的型特異性，具有一定的A型菌株的廣譜性。 本研究在研制出A型副雞嗜血桿菌的特異性單克隆抗體的基礎(chǔ)上建立了