玉米種子人工老化過程中胚蛋白質組的變化研究.pdf

1、雙向電泳具有極高的分辨率和靈敏度,可以有效分離組織或細胞內(nèi)各種蛋白,它在了解細胞活動全貌方面具有巨大的優(yōu)勢,是目前分離復雜蛋白質混合物的最有效的方法之一。本研究以玉米品種農(nóng)家大白頭種子為材料,通過蛋白質雙向電泳和肽質量指紋圖譜技術,分析了人工老化后的3個不同活力水平的種子胚蛋白質組的變化。主要結果如下：
　　 ⑴用TCA-丙酮沉淀法能夠獲得較好的蛋白質樣品,可以很好地滿足雙向電泳技術對樣品的要求。對于17cm,pH3-10的線性

2、IPG膠條而言,采用考馬斯亮藍法染色,在使用儀器自帶操作規(guī)程推薦的設定參數(shù)下,上樣量為0.8mg/Gel,上樣體積為350gμL的體系與上樣量為0.8mg/Gel,上樣體積為500gμL的體系相比,雙向電泳圖譜中橫向條紋少,蛋白點清晰且得到的蛋白點數(shù)量更多。
　　 ⑵在上樣量為0.8mg/Gel,體積為350μL的體系中,采用設定的雙向電泳體系對3個不同活力水平的玉米種子胚蛋白進行分離,采用PDQuest8.0.1軟件對圖像進行

3、分析,共在凝膠圖中發(fā)現(xiàn)400多個有效的蛋白質點,并對其中表達量差異超過2倍的蛋白質進行質譜鑒定,共成功鑒定出22個蛋白質。
　　 ⑶鑒定出的22蛋白質可根據(jù)其功能與參與的代謝途徑分為七類:Ⅰ:疾病/防御(5個);Ⅱ:蛋白質定位和儲藏(4個);Ⅲ:轉錄(3個);Ⅳ:合成代謝(1個);Ⅴ:能量(3個);Ⅵ:細胞生長/分裂(2個);Ⅶ:未知蛋白(4個)?？梢?種子老化后,種子胚中的蛋白質組發(fā)生了很大的變化,它們對種子活力的影響是多方面