一品紅遺傳轉化體系建立的初步研究.pdf

1、一品紅(Euphorbia pulcherrima Willd)為大戟科大戟屬植物，別名圣誕紅、圣誕花，是國內(nèi)外最重要盆花之一。世界年產(chǎn)量在2億盆以上，自然花期在元旦前后，利用常規(guī)育種手段不能改變自然花期，生產(chǎn)上通常采用花期調(diào)控技術來達到周年供應的目的，但需要現(xiàn)代溫室設施投入和大量能源消耗。采用基因工程技術轉入與開花相關的基因來調(diào)控開花基因的表達，是今后一品紅品種花期改良的重要途徑。
　　 試驗以一品紅嫩葉為外植體，從愈傷組織誘

2、導、根、芽器官分化等方面開展研究，建立了一品紅植株再生體系；在此基礎上，以一品紅‘天鵝絨'胚性愈傷組織為外植體，利用根癌農(nóng)桿菌介導法，開展了將擬南芥花分生組織特異相關基因AP1基因轉入一品紅的研究，主要研究結果如下：
　　 (1)通過對最適外植體、不同滅菌時間及抗褐化添加劑的篩選，以及不同植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)組合對愈傷組織誘導、芽誘導和根誘導效應的研究，建立了穩(wěn)定的一品紅再生體系。其中，一品紅愈傷組織誘導的最優(yōu)培養(yǎng)基為：MS+6-B

3、A0.5mg/L+2,4-D0.5 mg/L+Vc0.05g/L；誘導愈傷組織芽發(fā)生的最適宜培養(yǎng)基為：MS+NAA0.5 mg/L或6-BA0.5mgL+NAA0.1mg/L+Vc0.05g/L；誘導根分化的最有效培養(yǎng)基為：1/2MS+NAA1.0mg/L+IBA1.0mg/L+Vc0.05g/L；壯苗培養(yǎng)中采用1/2MS+NAA0.5mg/L+IBA0.5mg/L培養(yǎng)基，效果較好。
　　 (2)基于所建立的一品紅再生體系，以高

4、質(zhì)量愈傷組織為主要轉化受體，進行AP1基因的遺傳轉化。詳細探討了頭孢霉素、羧卞青霉素對一品紅外植體生長和農(nóng)桿菌抑菌效果的影響，優(yōu)化了轉化條件，即選用頭孢霉素300 mg/L、羧卞青霉素250 mg/L作為抑菌劑，選用30mg/L的卡那霉素作為篩選濃度。最后，采用GUS染色和PCR檢測，發(fā)現(xiàn)抗性愈傷組織上的不同部分呈現(xiàn)深藍色，轉基因材料DNA在引物1擴增出約700bp的片段，引物2和3處，分別擴增出約400bp片段，進一步目表明目標基因已