葡萄離體再生體系及遺傳轉(zhuǎn)化體系的初步建立.pdf

1、以葡萄砧木品種'F-242’(Fercal，Berl.ColombardNolA×333EM)帶芽新梢和釀酒葡萄品種‘霞多麗’(VitisVinifera(L.)，Chardonnay）胚性細胞團為材料，初步建立了葡萄砧木品種'F-242’離體莖段再生體系，釀酒葡萄品種‘霞多麗’胚性細胞懸浮系和遺傳轉(zhuǎn)化體系，為進一步研究葡萄的遺傳轉(zhuǎn)化和進行葡萄轉(zhuǎn)基因育種提供了理論依據(jù)和技術(shù)支持。
　　 以葡萄砧木品種'F-242’帶芽新梢為材料

2、，研究了消毒時間，激素種類及其濃度配比，基本培養(yǎng)基對外植體生根的影響。結(jié)果表明，消毒時間長短對葡萄無菌繁殖系的建立影響很大，75％乙醇15s，結(jié)合0.1％的升汞8min為葡萄砧木品種‘F-242’最佳的外植體消毒時間。附加生長素類物質(zhì)IAA和IBA可以明顯促進‘F-242’外植體生根，且IAA處理的綜合效果要明顯優(yōu)于IBA，IAA的最佳附加濃度為0.1mg/L。不同的基本培養(yǎng)基對葡萄品種'F-242’外植體生根影響顯著。其中在MS基本培

3、養(yǎng)基上培養(yǎng)的外植體生根率為最高。
　　 以葡萄砧木品種‘F-242’試管苗為材料，研究了外植體類型（葉片、莖段、葉柄），激素種類及其濃度配比，基本培養(yǎng)基、暗培養(yǎng)時間對不定芽誘導(dǎo)的影響。結(jié)果顯示，以莖段為外植體的不定芽誘導(dǎo)率為最高，其次是葉柄。莖段的最適培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0mg/L+IBA0.05mg/L，誘導(dǎo)率最高可達30％。前期暗處理對不定芽的誘導(dǎo)影響顯著，2周為最佳的暗培養(yǎng)時間。
　　 以‘霞多麗’胚性細胞團

4、為材料，初步建立了‘霞多麗’懸浮系，并研究了不同激素及其濃度配比，不同種類及濃度的碳源以及谷氨酰胺對懸浮細胞生長的影響。結(jié)果表明，2，4-D和NOA均可以抑制胚性細胞的分化，但2,4-D更有利于細胞的增殖，最佳的2，4-D附加濃度為1mg/L。同等濃度的麥芽糖比蔗糖更利于細胞的生長，15g/L為霞多麗胚性懸浮細胞生長的最佳蔗糖濃度。附加谷氨酰胺可以顯著提高懸浮細胞的生長，其中以500mg/L為最佳。
　　 以‘霞多麗’胚性懸浮細