麻瘋樹遺傳轉(zhuǎn)化體系建立的初步研究.pdf

1、選擇合適的篩選劑及抗生素種類和濃度是利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法進(jìn)行植物基因工程研究獲得轉(zhuǎn)化植株以及較高轉(zhuǎn)化植株的一個重要前提。以麻瘋樹的子葉、真葉、根及其對應(yīng)的愈傷組織作為實(shí)驗材料，研究各種抗生素對其生長的影響。在MS培養(yǎng)基中添加不同濃度和不同種類的抗生素，比較其對麻瘋樹不同外植體及對應(yīng)愈傷組織生長的影響。方差分析和總體觀察的結(jié)果表明，用于篩選轉(zhuǎn)化植株的最佳抗生素是卡那霉素，其最佳抗性篩選濃度應(yīng)該為10-25mg/L。氨芐青霉素和特美汀是兩種

2、抑菌性抗生素，一般的使用濃度為500mg/L，不同菌株有定的差異，使用原則是達(dá)到抑菌目的的同時使抗生素對植物愈傷組織形成和分化的影響最少，即盡量降低其濃度。綜合分析，本實(shí)驗中，氨芐青霉素對麻瘋樹外植體的生長影響較小，實(shí)際還需要考慮抑菌效果?！　榱藰?gòu)建麻瘋樹的遺傳轉(zhuǎn)化體系，首先應(yīng)建立其高頻再生和高效轉(zhuǎn)化系統(tǒng)，而瞬時表達(dá)測試是優(yōu)化轉(zhuǎn)化系統(tǒng)條件的快速有效的方法。影響瞬時表達(dá)的因素很多，本實(shí)驗主要對四個因素進(jìn)行測試：預(yù)培養(yǎng)天數(shù)(1天、2天)

3、、不同激素配比的分化培養(yǎng)(IBA1.0mg/L+BA0.4mg/L、IBA0.2mg/L+BA2mg/L)、是否加入乙酰丁香酮(+AS、-AS)、外植體類型(子葉、真葉、下胚軸、根)。瞬時表達(dá)率=有g(shù)us基因瞬時表達(dá)的外植體個數(shù)/總外植體數(shù)，綜合外植體瞬時表達(dá)的程度，最后得出初步結(jié)論：麻瘋樹(培養(yǎng)35天左右)子葉在分化培養(yǎng)基(IBA1mg/L，BA0.4mg/L)上預(yù)培養(yǎng)2天，并且在預(yù)培養(yǎng)基和離心后的MS0農(nóng)桿菌菌液中加入AS，最后得到