放線菌菌株Y23活性物質的分離純化及理化性質的初步研究.pdf

1、煙草青枯病是由茄勞爾氏菌[Ralstonia solanacearum（E.F.Smith）]引起的一種細菌性病害，在國內的廣東、福建等南方地區(qū)普遍發(fā)生。近幾年來，該病的發(fā)生和危害范圍有向北方煙區(qū)擴展的趨勢，在山東、河南及陜西等省均有發(fā)生，局部地區(qū)為害較重，已成為煙草主要病害之一。
　　 本實驗室從來源于山東臨沂的煙田土樣中篩選出一株放線菌菌株Y23，該菌株對煙草青枯病菌等多種植物病原菌有明顯的抑制作用。本實驗主要從菌株Y23發(fā)

2、酵抑菌活性物質的穩(wěn)定性、理化性質、分離提純方法等幾個方面進行研究：
　　 1.分別采用抑制菌絲生長速率法和瓊脂擴散法測定了Y23菌株發(fā)酵液對15種病原真菌、3種病原細菌的抑菌活性。結果表明，Y23菌株發(fā)酵液對禾谷鐮刀菌、蘋果輪紋病菌、大麥條紋病菌的菌絲生長抑制率達55％以上，占供試真菌數(shù)的20％；瓊脂擴散法生測結果表明，Y23菌株發(fā)酵液只對煙草青枯病菌有抑制作用。發(fā)酵液的穩(wěn)定性測定結果表明，發(fā)酵液低溫貯藏效果好，對熱、酸堿及紫外

3、光照穩(wěn)定性較強，對日光照穩(wěn)定性較差。
　　 2.發(fā)酵液通過有機溶劑萃取實驗，選擇乙酸乙酯為適宜的萃取劑。經(jīng)預處理、溶媒萃取等步驟后，采用硅膠柱色譜對活性物質進行分離。首先以硅膠薄層色譜初步篩選分離條件，在此基礎上，進一步優(yōu)化柱色譜條件：依次采用石油醚：異丙醇為9:1、7:3、5:5、2:8洗脫，結果取得了較好的分離效果。最后采用硅膠薄板層析法，以石油醚：異丙醇：甲醇為10:1:0.5做展開劑薄層層析時，分離得到了1種對煙草青枯病

4、菌有明顯抑菌作用的活性物質。
　　 3.利用高效液相色譜對分離產(chǎn)品進行純度分析，為得到最佳的效果，試驗對色譜條件進行優(yōu)化，結果為：色譜柱EclipseXDB_C18，5μm，4.6㎜×150㎜；以甲醇-水系統(tǒng)60:40為流動相；流動相流速為1mL/min；柱溫30℃；紫外檢測波長207nm。結果表明，分離提取的活性物質純度較高，可以滿足光譜分析等進一步研究的需要。
　　 4.拮抗產(chǎn)物純品的理化性質和官能團反應。通過捷克八