海綿放線菌抑菌活性菌株的篩選及HVG29菌株代謝產(chǎn)物的分離與結(jié)構(gòu)鑒定.pdf

1、海洋放線菌在苛刻的海洋環(huán)境下的進(jìn)化過程,造就了其復(fù)雜而獨特的代謝途徑,其次級代謝產(chǎn)物在結(jié)構(gòu)類型及生物活性方面都呈現(xiàn)出與陸生放線菌不同的特點和多樣性。開發(fā)海洋放線菌資源,尋找新型藥物活性先導(dǎo)化合物已成為當(dāng)前的研究熱點。海綿是最原始的多細(xì)胞動物,濾食性的攝食方式使其體內(nèi)富集了大量微生物,其中也包括大量海洋放線菌,因此海綿成為海洋放線菌的一個重要來源。
　　 本文以來自大連海域的繁茂膜海綿、腎指海綿以及來自南海海域的澳大利亞厚皮海綿、

2、細(xì)薄星芒海綿、多皺軟海綿、南海小軸海綿中分離出的101株海綿放線菌為研究對象,以三株農(nóng)業(yè)致病菌胡蘿卜軟腐歐文氏菌、野油菜黃單孢菌及水稻黃單胞菌為篩選模型,對菌株進(jìn)行活性篩選,發(fā)現(xiàn)約有40％的菌株具有不同程度的抑菌活性。其中28株菌對胡蘿卜軟腐歐文氏菌具有抑制作用,29株菌對野油菜黃單孢菌表現(xiàn)出抑菌活性,32株菌對水稻黃單胞菌具有抑制作用；有30株菌同時對一種以上的致病菌具有抑菌活性,其中有19株菌同時對三種致病菌具有抑菌活性,分別占供測

3、菌株的30％和19％。選擇其中活性最好的HVG29菌株,運(yùn)用16S rDNA序列分析方法進(jìn)行種屬鑒定,菌種的鑒定的結(jié)果為HVG29屬于鏈霉菌屬。
　　 將Streptomyces sp.HVG29進(jìn)行了大規(guī)模液體發(fā)酵,三批發(fā)酵獲得發(fā)酵液約45 L,對發(fā)酵液上清和菌絲體沉淀分別進(jìn)行提取,共得到HVG29菌株的代謝產(chǎn)物粗提物約17g。將粗提物應(yīng)用硅膠柱層析、薄層層析、Sephadex L,H-20凝膠柱層析、制備薄層層析等方法進(jìn)行分

4、離純化,最后得到3種單體化合物:HVG29-1(7.8 mg)、HVG29-2(5.3mg)、HVG29-5(5.9 mR)。運(yùn)用EI-MS、HRESI-MS、1H NMR、13C NMR、DEPT、H-HCOSY、HSQC、HMBC等光譜學(xué)方法,對三種單體化合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了鑒定:HVG29-1、HVG29-2、HVG29-5三種化合物均屬于核苷類化合物,其中HVG29-1與HVG29-5為已知化合物,分別為3-甲基胸苷(3-Methy