江蘇省部分地區(qū)動(dòng)物弓形蟲(chóng)病血清學(xué)調(diào)查及豬弓形蟲(chóng)病人工發(fā)病模型的建立.pdf

1、弓形蟲(chóng)病是一種嚴(yán)重的人畜共患病，該病在世界范圍內(nèi)廣泛的感染著人類(lèi)、哺乳動(dòng)物以及鳥(niǎo)類(lèi)。豬弓形蟲(chóng)病最早由美國(guó)Farrell報(bào)道，我國(guó)于1959年從豬體內(nèi)分離到弓形蟲(chóng)。豬弓形蟲(chóng)病在美國(guó)、日本等一些國(guó)家較為嚴(yán)重，我國(guó)上世紀(jì)70年代暴發(fā)的豬“無(wú)名高熱”其中的因素之一就是豬弓形蟲(chóng)病。本病多在3～4月齡的豬群中發(fā)生，死亡率高達(dá)30～40％，其中以乳豬的死亡率最高，成年豬發(fā)病較少，多數(shù)呈隱性感染或只出現(xiàn)輕微的癥狀。
　　 為了摸清弓形蟲(chóng)病在動(dòng)物

2、群體中的流行趨勢(shì)，我們首先對(duì)江蘇省部分地區(qū)（徐州、連云港、鹽城、宿遷、南通、泰州、揚(yáng)州、南京、常州、宜興、昆山）動(dòng)物弓形蟲(chóng)病進(jìn)行血清學(xué)調(diào)查。弓形蟲(chóng)抗體的測(cè)定以間接血凝實(shí)驗(yàn)（IHA）方法進(jìn)行，血清樣品稀釋度在1:64時(shí)，致敏血球的凝集度達(dá)到“++”50％以上凝集的血清樣品判為陽(yáng)性。結(jié)果顯示在所調(diào)查的1100份動(dòng)物血清樣品中弓形蟲(chóng)抗體呈陽(yáng)性者為145份，占總調(diào)查動(dòng)物血清數(shù)的13.2％，其中939份豬血清樣品中弓形蟲(chóng)抗體呈陽(yáng)性樣品數(shù)120份，

3、占總調(diào)查豬血清樣品的12.8％，總體上反映出了江蘇省內(nèi)動(dòng)物感染弓形蟲(chóng)的概況。
　　 針對(duì)弓形蟲(chóng)病在抗原檢測(cè)較難的問(wèn)題上我們建立了弓形蟲(chóng)PCR檢測(cè)方法，以便提高弓形蟲(chóng)抗原在組織樣品中的檢出率。以B1基因建立PCR檢測(cè)方法，采用倍比稀釋法將一定數(shù)目的弓形蟲(chóng)速殖子分別稀釋至1.34×10-5、6.69×10-6、3.35×10-6、1.67×10-6、8.36×10-6、4.18×10-7、2.09×10-7、1.04×10-7、5.

4、2×10-8、2.6×10-8μg弓形蟲(chóng)體的DNA，測(cè)定PCR方法檢測(cè)弓形蟲(chóng)的敏感度，并用此方法檢測(cè)弓形蟲(chóng)慢性感染鼠腦組織內(nèi)形成的包囊。結(jié)果顯示該P(yáng)CR方法能夠檢測(cè)到5.2×10-8μg弓形蟲(chóng)體DNA，能夠從弓形蟲(chóng)慢性感染鼠腦組織中順利的檢測(cè)到已經(jīng)形成包囊的弓形蟲(chóng)DNA。
　　 以豬源弓形蟲(chóng)強(qiáng)毒蟲(chóng)株南京湯山株弓形蟲(chóng)（NT株）為基礎(chǔ)蟲(chóng)株，分別以肌肉注射（500萬(wàn)個(gè)弓形蟲(chóng)速殖子）、腹腔注射（5000萬(wàn)個(gè)弓形蟲(chóng)速殖子）、腹腔注射（1億

5、個(gè)弓形蟲(chóng)速殖子）三種方式感染30日齡的斷奶仔豬。結(jié)果顯示，3～7天后三種感染方式均出現(xiàn)典型的弓形蟲(chóng)病癥狀：持續(xù)高溫、精神倦怠、呼吸困難、食欲不振，并隨著病程的變化轉(zhuǎn)為慢性弓形蟲(chóng)病或者死亡，證明本研究成功建立了豬弓形蟲(chóng)病人工發(fā)病模型，初步制定了豬弓形蟲(chóng)病人工發(fā)病標(biāo)準(zhǔn)。
　　 對(duì)江蘇省動(dòng)物弓形蟲(chóng)血清學(xué)的調(diào)查，表明了該病在全省范圍內(nèi)普遍存在；套式PCR檢測(cè)方法的建立為評(píng)價(jià)紫外線(xiàn)致弱蟲(chóng)株的生物安全性提供了有力的技術(shù)支持；建立豬弓形蟲(chóng)人工