酶法制備大越豆芋ACE抑制肽的研究.pdf

1、ZhejiangA&FUniversiDissertationfortheDegreeofMasterI吶EnzymaticPreparationofACEinhibitorypeptidesfromApiosamericanaMedikusCandidate：XiZhuangAdviser：YouzuoZhangSpecialty：FoodprocessingandsecurityDateofSubmission：June，2013Z

2、hejiangA&FUniversityLin’an，zhejiangprovince，PRChinaJune，2013摘要摘要大越豆芋(ApiosamericanaMedikus)是一種豆科植物，其塊莖中的蛋白質(zhì)相對高于其它塊莖類植物。研究證明，大越豆芋塊莖具有抑制腫瘤細(xì)胞生長，降低血壓和血脂的功效。本文試以大越豆芋為原料，利用酶法生產(chǎn)具有ACE抑制活性的低聚肽。旨在為大越豆芋資源在國內(nèi)開發(fā)利用提供更多的途徑，為大越豆芋的研究提供新的

3、思路。本文的主要內(nèi)容包括以下幾個(gè)方面：1選擇生產(chǎn)血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(angiotensinconvertingenzyme，ACE)抑制肽的最佳品種的蛋白酶，之后用單因素實(shí)驗(yàn)對酶解條件進(jìn)行初步的探索，然后通過正交實(shí)驗(yàn)確定酶解最佳條件。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，堿性蛋白酶的酶解產(chǎn)物無論在水解度還是ACE抑制活性方面都明顯優(yōu)于其它酶。正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示堿性蛋白酶水解大越豆芋蛋白的最佳條件是：62℃，pH8。5，底物濃度為12％，加酶量為3000U／g。比較酶解

4、前后蛋白質(zhì)氨基酸組成成分，發(fā)現(xiàn)酶解過程對豆芋蛋白的氨基酸組成成分基本沒有影響，用凝膠色譜SepHadexG25測定對水解后產(chǎn)物分子量分布進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)堿性蛋白酶酶解效果良好，酶解3h后產(chǎn)生大量分子量為5kd一下的多肽。2對大越豆芋酶解產(chǎn)物進(jìn)行超濾脫鹽處理，發(fā)現(xiàn)分子量在3kda以下的低聚肽ACE抑制活性最高，進(jìn)行超濾時(shí)用濃度為08％的溶液在250KPa下超濾一小時(shí)內(nèi)效率最高。在用DA201C大孔樹脂對肽溶液脫鹽過程中發(fā)現(xiàn)70％乙醇濃度洗脫

5、組分的ACE抑制活性最高，其IC50為0187mg／mL。3對經(jīng)過脫鹽和超濾處理后的具有ACE抑制活性的肽進(jìn)行進(jìn)一步純化，首先用DEAE—SepHaroseFastFlow陰離子交換樹脂進(jìn)行分離，分離產(chǎn)物出現(xiàn)三個(gè)洗脫峰I、II、III，通過對三個(gè)峰進(jìn)行測定，發(fā)現(xiàn)FIII具有ACE抑制活性最強(qiáng)。將FIⅡ用葡聚糖凝膠色譜進(jìn)行進(jìn)一步分離純化，出現(xiàn)兩個(gè)洗脫峰1、2其中2具有較高的ACE抑制活性，其IC50可達(dá)3747ug／mL。4對制得的ACE

6、抑制肽進(jìn)行理化性質(zhì)的測定發(fā)現(xiàn)其起泡性達(dá)130％，但泡沫穩(wěn)定性較差，其乳化性可達(dá)100％，8h后的乳化穩(wěn)定性達(dá)到542％，乳化穩(wěn)定性較好。在對其穩(wěn)定性測定后發(fā)現(xiàn)，大越豆芋ACE抑制肽具有良好的熱穩(wěn)定性及光穩(wěn)定性，對食品添加劑穩(wěn)定性的測試中發(fā)現(xiàn)，B一環(huán)狀糊精對其活性具有一定影響，其他三種對其活性影響不大。體外模擬消化實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，ACE抑制肽的IC50從383pg／mL升至481ug／mL，說明其體外消化穩(wěn)定性較好。關(guān)鍵詞：大越豆芋，ACE