羅漢果種質(zhì)資源的DNA指紋圖譜研究.pdf

1、羅漢果是我國特有的藥用植物和經(jīng)濟(jì)作物,其豐富的種質(zhì)資源是羅漢果良種繁育的物質(zhì)基礎(chǔ)。為了有效地鑒別羅漢果種質(zhì)資源,科學(xué)合理利用羅漢果資源和保護(hù)新品種的知識產(chǎn)權(quán),本研究利用ISSR和RAPD兩種分子標(biāo)記技術(shù),構(gòu)建了羅漢果種質(zhì)資源的DNA指紋圖譜,并進(jìn)行了遺傳多樣性分析,主要結(jié)論如下：1.利用BSA法在每個品種種質(zhì)不同個體間取等量的DNA組成品種種質(zhì)DNA池,以栽培9個種質(zhì)和野生8個種質(zhì)進(jìn)行引物篩選,從100條ISSR引物和250條RAPD引

2、物中篩選出16條ISSR和28條RAPD多態(tài)性引物,對所有54個栽培樣品和36個野生樣品進(jìn)行PCR擴(kuò)增,從而確定不同品種種質(zhì)的特征帶,利用品種種質(zhì)DNA池分別構(gòu)建了羅漢果栽培種質(zhì)與野生種質(zhì)的DNA指紋圖譜。2.選用10條ISSR引物和16條RAPD引物分別構(gòu)建羅漢果栽培種質(zhì)與野生種質(zhì)的ISSR和RAPD指紋圖譜,并分別統(tǒng)計指紋圖譜中的特征帶位置與可鑒別種質(zhì)名稱。以ISSR引物857和RAPD引物S19與S362組合為例,編制了羅漢果栽培

3、種質(zhì)的簡易指紋檢索表；以ISSR引物873和RAPD引物S26為例,編制了羅漢果野生種質(zhì)的簡易指紋檢索表,用于快速準(zhǔn)確鑒定羅漢果種質(zhì)資源。3.選用12條ISSR引物對羅漢果種質(zhì)資源進(jìn)行ISSR遺傳多樣性分析。羅漢果種質(zhì)總多態(tài)性條帶百分比為77.59%,各種質(zhì)的多態(tài)性條帶百分比在59%~68%之間,其中野生種質(zhì)的多態(tài)百分比高于栽培種質(zhì)。各種質(zhì)間的遺傳相似度變化在0.5107~0.9570之間,根據(jù)相似度平均值0.7376,表明總體上羅漢果

4、各品種種質(zhì)之間的親緣關(guān)系較近,但又存在一定的遺傳變異。通過栽培種質(zhì)和野生種質(zhì)的整體比較,野生種質(zhì)的遺傳相似度較低,具有更高的遺傳變異性；另外栽培和野生雄株均比雌株的遺傳相似度低,雄株具有更高的遺傳多樣性性；在雜交育種的雌雄組合上,栽培與野生的雜交組合比栽培種質(zhì)間、野生種質(zhì)間的雌雄組合更佳。ISSR聚類分析和主坐標(biāo)分析將17份羅漢果種質(zhì)主要分為栽培種質(zhì)、野生種質(zhì)、栽培青皮雄株三大類。4.選用16條RAPD引物對羅漢果種質(zhì)資源進(jìn)行RAPD遺

5、傳多樣性分析。羅漢果種質(zhì)總多態(tài)性條帶百分比為79.52%,各種質(zhì)的多態(tài)性條帶百分比在61.80%~66.99%之間,其中野生種質(zhì)多態(tài)百分比也略高于栽培種質(zhì)。種質(zhì)間遺傳相似度平均值為0.7616,表明總體上羅漢果種質(zhì)之間的親緣關(guān)系較近。羅漢果種質(zhì)資源的RAPD遺傳多樣性分析也與ISSR基本一致,野生種質(zhì)比栽培種質(zhì)的遺傳多樣性高,雄株比雌株的遺傳多樣性性高。RAPD聚類分析和主坐標(biāo)分析也將17份羅漢果種質(zhì)主要分為栽培種質(zhì)、野生種質(zhì)、栽培青皮

6、雄株三大類,與ISSR分析大體一致；略有差異的是RAPD聚類分析把野生冬瓜種質(zhì)、野生紅毛雄株從野生種質(zhì)中細(xì)分出來,單獨(dú)聚成兩小類。5. ISSR和RAPD兩種標(biāo)記構(gòu)建的DNA指紋圖譜效果較好,可以用于羅漢果種質(zhì)資源的快速準(zhǔn)確鑒定。在羅漢果種質(zhì)資源遺傳多樣性研究中兩標(biāo)記的結(jié)果具有較高的一致性,主坐標(biāo)分析中對羅漢果種質(zhì)在PCA空間中的排序圖也相類似,野生種質(zhì)排序分布比栽培種質(zhì)松散,說明野生種質(zhì)的遺傳多樣性高于栽培種質(zhì),主坐標(biāo)分析支持聚類分析