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1、亞熱帶地區(qū)氣候炎熱，奶牛易發(fā)乳房炎，本文構(gòu)建了奶牛乳腺特異性表達人溶菌酶(hLZ)基因的載體并在乳腺細胞進行驗證。參照hLZ基因序列(GenBank:NM_000239.2)設(shè)計引物，采用RT-PCR的方法從人胎盤組織中成功擴增克隆了長406bp的hLZ基因成熟肽片段。應用實驗室已有的娟姍牛乳腺特異性表達調(diào)控元件，經(jīng)過多步酶切-連接-轉(zhuǎn)化-篩選-鑒定，構(gòu)建了奶牛乳腺表達hLZ的載體pBCN5.2-hLZ-I.I-EGFP-neo(13.
2、6kb)和pBCN-3.8-hLZ-1.1-EGFP-neo(12.2kb)，經(jīng)過酶切、PCR和測序驗證載體構(gòu)建正確。將構(gòu)建的2個載體瞬時轉(zhuǎn)染Bcap細胞，24h后可以觀察到EGFP表達的細胞，然后純化細胞總RNA，通過實時定量PCR檢測比較hLZ的表達豐度，結(jié)果顯示，pBCN5.2-hLZ-1.1-EGFP-neo載體相對表達量為0.89±0.04，pBCN-3.8-hLZ-1.1-EGFP-neo為0.62±0.05，前者表達效率較
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