油菜突變體庫(kù)構(gòu)建與激素反應(yīng)基因克隆分析.pdf

1、激活標(biāo)記技術(shù)(activation tagging)是構(gòu)建功能獲得突變體為研究對(duì)象,在植物功能基因組學(xué)的研究中具有重要的作用。該技術(shù)在模式植物擬南芥中已經(jīng)得到廣泛的應(yīng)用,但是在油菜中還未見(jiàn)報(bào)道。
　　 本研究以優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的油菜品種1244W6為材料,采用浸花蕾方法,將含有激活標(biāo)記和Basta篩選標(biāo)記質(zhì)粒pSKI015的農(nóng)桿菌進(jìn)行轉(zhuǎn)化,成功構(gòu)建了油菜激活標(biāo)記突變體庫(kù)。通過(guò)Basta篩選,結(jié)果共獲得約30000個(gè)轉(zhuǎn)基因株系(T1代)。

2、轉(zhuǎn)化效率約為1％。對(duì)突變體庫(kù)的T1代轉(zhuǎn)基因植株表型進(jìn)行觀察,共發(fā)現(xiàn)39個(gè)株系有明顯的表型變化,約占轉(zhuǎn)化植株總數(shù)的千分之五,包括葉色、分枝數(shù)、植株的育性以及開(kāi)花期等方面的變異。這將為開(kāi)展油菜分子遺傳學(xué)研究提供豐富的資源。將突變體T2代種子播種在含不同濃度植物激素的營(yíng)養(yǎng)液中,結(jié)果篩選出激素反應(yīng)突變體63個(gè)。這些激素反應(yīng)突變體的獲得,為揭示油菜激素代謝調(diào)控及激素調(diào)控油菜生長(zhǎng)發(fā)育、產(chǎn)量和含油量的分子機(jī)理提供了材料。采用TAIL-PCR技術(shù),克隆