化學(xué)處理和熱處理脫除蘋果潛隱性病毒的研究.pdf

1、蘋果莖溝病毒（Apple stem grooving virus，ASGV）、蘋果莖痘病毒（Apple stem pitting virus，ASPV）、蘋果褪綠葉斑病毒（Apple chlorotic leaf spot virus，ACLSV）是蘋果上3種重要的潛隱性病毒，廣泛分布于世界各蘋果種植區(qū)。這3種病毒通常不表現(xiàn)明顯癥狀，但影響樹勢，降低產(chǎn)量。栽培無病毒苗木是杜絕這類病毒危害的主要途徑，化學(xué)處理和變溫?zé)崽幚硎谦@得蘋果無病毒種

2、質(zhì)的重要方法。本研究以22個蘋果品種和砧木的繼代苗為試材，以RT-PCR技術(shù)為檢測手段，探討3種化學(xué)藥劑處理和熱處理對試材的生長狀況及脫毒效率的影響，進(jìn)一步了優(yōu)化傳統(tǒng)的脫毒體系，提高了脫毒效率，主要結(jié)果如下：
　　 1.在培養(yǎng)基中添加不同濃度的阿昔洛韋、病毒靈和病毒醚3種化學(xué)藥劑對蘋果莖尖進(jìn)行常溫暗培養(yǎng)，處理40d后取2mm莖尖繼代培養(yǎng),40d后利用RT-PCR方法進(jìn)行病毒檢測，結(jié)果表明，阿昔洛韋和病毒靈的最佳濃度分別為60mg

3、/L和40mg/L，在此濃度下，蘋果莖痘病毒和蘋果褪綠葉斑病毒的脫除率均達(dá)到100％，而蘋果莖溝病毒的脫除率分別為63％和62％。病毒醚的最佳濃度為10mg/L，在此濃度下三種潛隱性病毒的脫除率均達(dá)到100％。病毒醚、阿昔洛韋和病毒靈的脫除效率分別為230.5％、169.47％、143.22％。
　　 2.10mg/L病毒醚處理?xiàng)l件下，無論是熱處理還是常溫培養(yǎng)，在暗培養(yǎng)條件下，三種潛隱性病毒的脫除率均達(dá)到100％，顯著高于光培養(yǎng)

4、的脫毒率，并且由于增殖系數(shù)和莖尖分化率的不同，暗培養(yǎng)的脫毒效率均顯著高于光培養(yǎng)；無論是在光培養(yǎng)還是暗培養(yǎng)條件下，熱處理的脫除率均顯著高于常溫培養(yǎng)。
　　 3在暗培養(yǎng)結(jié)合熱處理的條件下，6-BA和GA3的最佳濃度分別為2.0mg/L和0.3 mg/L，在此濃度下ACLSV和ASPV的脫除率均為100％，ASGV的脫除率均為95％，脫除效率分別提高了273.9％和109.5％；NAA的最適濃度為0.4mg/L，脫毒率為90％，但由于

5、增殖系數(shù)的下降，其脫毒效率反而降低了54.2％。
　　 4不同蘋果品種和砧木類型組培苗對熱處理結(jié)合暗培養(yǎng)脫毒反應(yīng)不盡相同。試驗(yàn)結(jié)果表明：不同的蘋果品種和砧木耐熱性差異明顯。其中王林、喬納金、嘎拉、金冠、珠美海棠、P22的耐熱性最強(qiáng)；GM256、弘前、SH系耐熱性最差；惠民短枝富士、濃紅富士、天紅1號、B9、M9、P59、77-34、天紅2號、Jazz的耐熱性居中。在相同處理下不同的蘋果基因型脫除蘋果潛隱性病毒的效果存在差異，惠民

6、短枝富士、SH17、M9、弘前、GM256脫毒效率最高；77-34、P59、P22、天紅1號次之；喬納金、SH40、SH38、濃紅富士的脫毒率最低。另外在相同的條件下，同一試材不同病毒的脫除率也存有差異，ACLSV最容易脫除，ASGV最難脫除，ASPV居中。
　　 5比較了22個蘋果品種和砧木組培苗對10mg/L病毒醚脫毒的反應(yīng)。結(jié)果表明，不同的蘋果品種和砧木抗藥性差異顯著。嘎拉、弘前、珠美海棠、B9、P22、P59、77-34

7、、GM256、M9抗藥性最強(qiáng)；SH17、天紅2號、天紅1號、惠民短枝富士、SH29、SH40、SH38、王林、喬納金次之；金冠、濃紅富士、SH28、Jazz 抗藥性最差。除天紅2號、濃紅富士、Jazz、SH38、SH29 外，其余品種和砧木三種潛隱性病毒的脫除率均為100％。說明10mg/L病毒醚脫毒處理適合于大多數(shù)蘋果品種和砧木，該技術(shù)具有較為廣泛的適用性。
　　 6.采用PAS-ELISA與RT-PCR兩種方法對同一批試材的