胭脂魚幼魚適宜蛋白水平及中草藥對(duì)其非特異性免疫機(jī)能的影響.pdf

1、本文以胭脂魚（Myxocyprinus asiaticus）幼魚為試驗(yàn)對(duì)象，研究涉及營養(yǎng)學(xué)和免疫學(xué)兩部分，第一部分探討了胭脂魚幼魚飼料中適宜的蛋白質(zhì)需求量，第二部分探討了3種中草藥提取物的組方（包括蜂膠配淫羊藿、黃芪配甘草、陳皮）作為免疫增強(qiáng)劑對(duì)胭脂魚幼魚非特異性免疫力和抗病力的影響。主要研究結(jié)果如下：
　　 （1）飼料蛋白水平對(duì)胭脂魚幼魚生長和體組成的影響：以體重（13.5士1.1）g的胭脂魚為試驗(yàn)對(duì)象，以白魚粉作為主要蛋白源

2、，按6個(gè)蛋白質(zhì)水平梯度（30％、34％、38％、42％、46％、50％）設(shè)計(jì)等能的飼料，進(jìn)行8周的飼養(yǎng)試驗(yàn)，探討胭脂魚幼魚適宜的蛋白質(zhì)需求量。結(jié)果顯示，飼料蛋白質(zhì)水平對(duì)增重率（WG）和特定生長率（SGR）的影響基本均呈先升后降的變化趨勢(shì)，WG和SGR最大值均出現(xiàn)在蛋白質(zhì)含量46％的飼料組，分別為（187.70士8.01）％和（1.89士0.11）％/天，與蛋白質(zhì)含量42％及以下的飼料組比較有顯著性差異（P<0.05），與蛋白質(zhì)含量50％

3、的飼料組間沒有顯著差異；根據(jù)折線模型計(jì)算出折點(diǎn)對(duì)應(yīng)SGR的值為1.87％/天，對(duì)應(yīng)的飼料蛋白質(zhì)含量為46.5％；各組成活率（Survival）變化范圍在71％～90％，不同飼料蛋白質(zhì)含量對(duì)成活率無明顯影響；隨飼料蛋白質(zhì)含量的增加，飼料系數(shù)（FCR）大體呈下降的趨勢(shì)，最小值出現(xiàn)在46％飼料組；蛋白質(zhì)效率（PER）和蛋白質(zhì)利用率（PPV）均呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，最大值均出現(xiàn)在46％飼料組；魚體和肌肉粗蛋白的含量均隨飼料蛋白質(zhì)水平的升高而呈

4、顯著增加（P<0.05）；隨飼料蛋白質(zhì)含量的增加，肥滿度（CF）、肝體指數(shù)（HSI）、臟體指數(shù)（VSI）均呈大體升高的趨勢(shì)。結(jié)果表明，本試驗(yàn)條件下，胭脂魚幼魚飼料適宜蛋白質(zhì)含量為46.5％。
　　 （2）蜂膠配淫羊藿對(duì)胭脂魚幼魚非特異性免疫機(jī)能和抗病力的影響：醇提法制備中草藥蜂膠提取物（總黃酮含量約37.1％）和淫羊藿提取物（總黃酮含量約42.6％），二者按生藥重量比3：1合用，按質(zhì)量分?jǐn)?shù)0％（對(duì)照組）、0.1％、0.5％和1.

5、0％添加于基礎(chǔ)飼料成鰻粉中，飼喂胭脂魚幼魚，分別于第10 d、20 d、30 d、40 d、50 d采樣，不連續(xù)密度梯度分離法制備頭腎巨噬細(xì)胞，檢測(cè)細(xì)胞免疫指標(biāo)：采用中性紅吞噬試驗(yàn)檢測(cè)吞噬活性，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)呼吸爆發(fā)活力；取血清，檢測(cè)體液免疫指標(biāo)：利用溶壁微球菌（Micrococcus lysoleikticus）檢測(cè)溶菌酶活性，利用嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）檢測(cè)殺菌活性，利用兔血紅細(xì)胞檢測(cè)替代補(bǔ)體溶血活性

6、（ACH50）。結(jié)果顯示，蜂膠配淫羊藿O．5％劑量組在第40 d和第50 d、1.0％劑量組在第30 d的頭腎巨噬細(xì)胞吞噬活性均顯著高于對(duì)照組（P<0.05）；0.5％劑量組在第30 d和40 d的頭腎巨噬細(xì)胞呼吸爆發(fā)活力與對(duì)照組比較均有顯著性升高（P<0.05）；0.1％劑量組在第40 d和第50 d、0.5％劑量組在第20 d和第40 d、1.0％劑量組在第10 d的血清溶菌酶活性均顯著高于對(duì)照組（P<0.05）；第40 d，0.5

7、％劑量組的殺菌活性與對(duì)照組比較有顯著升高（P<0.05）；蜂膠配淫羊藿對(duì)ACH50則無明顯影響。飼喂50 d后，各組隨機(jī)取20尾魚，用A．hydrophila腹腔注射進(jìn)行攻毒試驗(yàn)，探討蜂膠配淫羊藿對(duì)胭脂魚幼魚抗病力的影響，結(jié)果顯示1周內(nèi)對(duì)照組的累積死亡率為75％，1.0％和0.1％劑量組的累積死亡率分別為45％和55％，0.5％劑量組的累積死亡率40％則顯著低于對(duì)照組（P<0.05）。表明蜂膠配淫羊藿可開發(fā)為一種新型的免疫增強(qiáng)劑，飼料中

8、適宜添加劑量為0.5％。
　　 （3）黃芪配甘草對(duì)胭脂魚幼魚非特異性免疫機(jī)能和抗病力的影響：醇提法制備黃芪提取物（黃芪多糖含量約為38.4％）和甘草提取物（甘草酸含量約為31.2％，總黃酮約為20.5％），二者按生藥重量比10：6合用，按質(zhì)量分?jǐn)?shù)0％（對(duì)照組）、0.1％、0.5％和1.0％添加于成鰻粉中，飼喂胭脂魚幼魚，分別于第10 d、20 d、30 d、40 d、50 d各取樣一次，分離頭腎巨噬細(xì)胞，檢測(cè)吞噬活性和呼吸爆發(fā)活

9、力等細(xì)胞免疫指標(biāo)；分離血清，檢測(cè)溶菌酶活性、殺菌活性和替代補(bǔ)體溶血活性等體液免疫指標(biāo)。結(jié)果顯示，1.0％劑量組在第30 d和第40 d、0.5％劑量組在第40 d以及0.1％劑量組在第50 d的頭腎巨噬細(xì)胞吞噬活性均顯著高于對(duì)照組（P<0.05）；0.5％劑量組在第20 d和第40 d、1.0％劑量組在第40 d和第50 d的頭腎巨噬細(xì)胞呼吸爆發(fā)活力與對(duì)照組比較均有顯著性升高（P<0.05）；1.0％劑量組在第20 d和第50 d、0.

10、5％劑量組在第30 d以及0.1％劑量組在第40 d的血清溶菌酶活性均有明顯增加，與對(duì)照組比較差異顯著（P<0.05）；1.0％劑量組在第30 d和第40 d、0.5％劑量組在第40 d和第50 d的殺菌百分率均有明顯升高，與對(duì)照組比較有顯著性差異（P<0.05）；1.0％劑量組在第40和50 d、0.5％劑量組在第30 d以及0.1％劑量組在第50 d的．ACH50與對(duì)照組比較均有明顯升高（P<0.05）。飼喂50 d后，各組隨機(jī)取2

11、0尾魚，用A．hydrophila腹腔注射進(jìn)行攻毒試驗(yàn)，探討黃芪配甘草對(duì)胭脂魚幼魚抗病力的影響，結(jié)果顯示1周內(nèi)0.5％和0.1％劑量組的累積死亡率分別為45％和60％，1.0％劑量組的累積死亡率35％則顯著低于對(duì)照組（P<0.05）。結(jié)果表明，黃芪配甘草可開發(fā)為一種新型的免疫增強(qiáng)劑，對(duì)胭脂魚幼魚免疫功能的提高表現(xiàn)出劑量一效應(yīng)關(guān)系，適宜添加劑量為1.0％。
　　 （4）陳皮對(duì)胭脂魚幼魚非特異性免疫機(jī)能和抗病力的影響：醇提法制備陳皮

12、提取物（總黃酮含量約為3.3％，橙皮苷含量約為1.6％），按質(zhì)量分?jǐn)?shù)0％（對(duì)照組）、0.1％、0.5％和1.0％添加于成鰻粉中，飼喂胭脂魚幼魚，分別于第10 d、20 d、30 d、40 d、50 d各取樣一次，分離頭腎巨噬細(xì)胞，檢測(cè)吞噬活性和呼吸爆發(fā)活力；分離血清，檢測(cè)溶菌酶活性、殺菌活性和替代補(bǔ)體溶血活性。結(jié)果顯示，第50 d時(shí)，陳皮提取物1.0％劑量組的頭腎巨噬細(xì)胞吞噬活性顯著高于對(duì)照組（P<0.05）；0.5％劑量組在第30 d

13、、1.0％劑量組在第40 d的頭腎巨噬細(xì)胞呼吸爆發(fā)活力與對(duì)照組比較均有顯著性升高（P<0.05）；第20 d，1.0％劑量組的血清溶菌酶活性比對(duì)照組有明顯增加（P<0.05）；陳皮提取物對(duì)血清殺菌活性和ACH50則無明顯影響。飼喂50 d后，各組隨機(jī)取20尾魚，用A．hydrophila腹腔注射進(jìn)行攻毒試驗(yàn)，探討陳皮對(duì)胭脂魚幼魚抗病力的影響，結(jié)果顯示1周內(nèi)1.0％、0.5％、0.1％劑量組的累積死亡率分別為50％、55％、65％，與對(duì)照

14、組比較差異并不顯著（P>0.05）。結(jié)果表明陳皮提取物能夠在一定程度上增強(qiáng)胭脂魚幼魚的非特異性免疫力，關(guān)于陳皮中單一成分橙皮苷對(duì)胭脂魚幼魚非特異性免疫力和抗病力的影響尚需進(jìn)一步研究。
　　 （5）中藥提取物的體外免疫試驗(yàn)：以胭脂魚幼魚的頭腎巨噬細(xì)胞為研究對(duì)象，探討兩種中藥提取物組方（蜂膠配淫羊藿、黃芪配甘草）對(duì)離體培養(yǎng)細(xì)胞免疫活性的影響。不連續(xù)密度梯度分離法制備頭腎巨噬細(xì)胞，純化，接種到96孔培養(yǎng)板，加入終濃度依次為0、25、5