瘦素對雞肝臟脫碘酶基因表達與活性的影響.pdf

1、甲狀腺素對禽類的生長發(fā)育起著十分重要的作用，而肝臟脫碘酶是調控循環(huán)甲狀腺激素穩(wěn)態(tài)的主要因子。本實驗室以往的研究結果顯示蛋內注射Leptin能夠程序化地影響出雛后肉雞的生長和發(fā)育，但是這種處理效應是否和血液中的甲狀腺激素水平與肝臟中脫碘酶表達的改變有關，還不清楚。因此本研究旨在探討：（1）蛋內注射Leptin對出雛后肉雞早期血清甲狀腺激素水平的影響；（2）蛋內注射Leptin對肝臟脫碘酶基因表達和活性的影響；（3）Leptin影響脫碘酶表

2、達與活性的可能機制。
　　 1蛋清內注射瘦素對肉雞血清甲狀腺激素水平和肝臟脫碘酶表達及活性的影響
　　 挑選蛋重相近的三黃肉雞種蛋，隨機分為兩組：對照組（Control，Con）在蛋清內注射100μL溶劑（Phosphate buffered saline，PBS），Leptin處理組注射5.0μg/100μLPBS（Lep）的重組小鼠Leptin，出雛后飼養(yǎng)至21日齡時采取肝臟和血清樣品。用放免的方法測定血清總T3水平

3、（Total T3，TT3），總T4水平（Total T4，TT4）和游離T3水平（Free T3，F(xiàn)T3）。實時熒光RT-PCR定量檢測21日齡肝臟使T4脫碘轉化為T3的脫碘酶1（D1）和使T3脫碘失活的脫碘酶3（D3）的基因表達，采用離子交換層析法檢測D1和D3的活性。結果表明：Lep組肉雞21日齡血清中FT3和TT3的含量均顯著升高（P<0.05），并且主要表現(xiàn)在雄性（P<0.05），雌性上述各指標與對照組相比無顯著差異。血清中T

4、4水平與對照組相比無顯著差異。D1的基因表達和活性均在Lep組雄性中顯著上調，而雌性與對照組相比無顯著差異。D3的基因表達在Lep組雄性中顯著下調，而在雌性中顯著上調，D3活性在Lep組雄性中顯著下調，雌性與對照組相比無差異。以上結果說明：蛋內注射Leptin能夠顯著提高出雛后肉雞血清T3和游離T3水平，與肝臟脫碘酶D1上調而D3下調有關，這種處理效應主要表現(xiàn)在雄性。
　　 2瘦素影響體外培養(yǎng)原代雞胚肝細胞中脫碘酶基因表達和活性

5、的機制研究
　　 很多研究表明leptin主要通過三條信號途徑（JAK-STAT途徑，MAPK途徑和PI3K途徑）起作用，然而瘦素到底通過哪條途徑影響雞胚肝細胞中脫碘酶的表達，還未見報道。為探討Leptin影響脫碘酶表達的可能機制，本試驗采用分離原代雞胚肝細胞，血清培養(yǎng)基預培養(yǎng)24 h，待細胞完全貼壁后，改用無血清添加胰島素、轉鐵蛋白和硒元素（ITS）培養(yǎng)液，并研究不同濃度的Leptin（0，1，10，100ng/mL）處理肝細

6、胞48 h對脫碘酶表達的影響。此外，分別采用Leptin三條信號通路的抑制劑（JAK2抑制劑：AG490、ERK抑制劑：PD98590、PI3K抑制劑：LY294002）分析Leptin影響肝細胞脫碘酶表達的可能信號通路。結果顯示：Leptin處理能夠顯著上調D1的基因表達與活性，同時下調D3的基因表達與活性；Leptin對D1的基因表達與活性的誘導作用可以被PI3K抑制劑LY294002逆轉；而三條信號通路抑制劑均不能逆轉Leptin