重組草魚干擾素對(duì)鯽魚的免疫保護(hù).pdf

1、I型干擾素是先天性免疫應(yīng)答的一類重要的細(xì)胞因子，在抗病毒和抗癌中都有廣泛地效用。鯽魚與草魚的I型干擾素有很高的同源性。在我們先前的實(shí)驗(yàn)中，重組草魚干擾素的免疫保護(hù)作用以及抗病毒功能已經(jīng)在草魚細(xì)胞和組織中得到了驗(yàn)證。為了探究重組草魚干擾素對(duì)鯽魚的免疫保護(hù)作用以及它的作用機(jī)制，我們用poly I:C建立了一個(gè)病毒感染鯽魚模型，然后用重組草魚干擾素進(jìn)行免疫保護(hù)實(shí)驗(yàn)。
　　在本實(shí)驗(yàn)中，我們構(gòu)建了pBV220-CiIFN重組質(zhì)粒并且用大腸桿

2、菌BL21(DE3) pLysS作為表達(dá)重組草魚干擾素的宿主菌。采用原核表達(dá)的方法42℃誘導(dǎo)4 h獲得大量的rCiIFN蛋白，進(jìn)一步通過切膠回收的方法得到純化的蛋白。最后經(jīng)過SDS-PAGE檢測(cè)純化后的rCiIFN大小約為21kDa，蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)出濃度為330μg/ml。將蛋白稀釋到合適濃度，為了評(píng)估在poly I:C下rCiIFN對(duì)鯽魚體內(nèi)的保護(hù)效果，我們采用口服的方法免疫鯽魚。在給鯽魚腹腔注射poly I:C之前，分別連續(xù)投

3、喂1d、2d和3d拌有rCiIFN蛋白的飼料，并確保每克魚體重能攝入1μg的重組蛋白。結(jié)果表明，與對(duì)照組的鯽魚相比，口服免疫的方法確實(shí)能對(duì)鯽魚起到更好的保護(hù)效果，其中連續(xù)投喂3d的鯽魚相對(duì)存活率是54.29％，要高于連續(xù)投喂2d和1d的存活率，連續(xù)投喂2d和1d的鯽魚存活率分別是47.83%和38.81%。然而對(duì)照組的存活率與實(shí)驗(yàn)組的相比則低得多，投喂了1d、2d和3d的存活率分別為16.25%、13.75%和12.50%。
　　

4、為進(jìn)一步了解重組草魚干擾素對(duì)鯽魚免疫保護(hù)的分子機(jī)理，我們通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法分析rCiIFN對(duì)PKR以及IFN的誘導(dǎo)表達(dá)效果。在鯽魚腹腔注射rCiIFN蛋白的24h、48h、72h以及對(duì)照組腹腔注射PBS后分別提取鯽魚肝、腸、心、腎、鰓五個(gè)組織的總RNA，之后反轉(zhuǎn)得到其cDNA。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法檢測(cè)鯽魚五個(gè)組織中IFN以及PKR的表達(dá)情況。通過與對(duì)照組相應(yīng)組織中IFN以及PKR的表達(dá)量相比，實(shí)驗(yàn)組腹腔注射了rCiIF