重組豬α干擾素與黃芪多糖聯(lián)合應(yīng)用的研究.pdf

1、本試驗(yàn)主要是以重組豬α干擾素和中草藥提取物黃芪多糖聯(lián)合應(yīng)用為出發(fā)點(diǎn)，通過(guò)研究豬α干擾素基因的克隆與表達(dá)、重組豬α干擾素的純化及活性測(cè)定、干擾素與黃芪多糖聯(lián)合用藥研究三個(gè)方面，研究豬α干擾素與黃芪多糖之間的聯(lián)合互作，以期研制出抗病毒活性高、免疫調(diào)節(jié)活性強(qiáng)的抗病毒復(fù)方制劑，為健康養(yǎng)殖提供理論指導(dǎo)。
　　一、豬α干擾素的原核表達(dá)
　　為了研究高效廣譜的基因工程抗病毒制劑，使用實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的豬α干擾素原核表達(dá)載體pET30a-pIFN

2、-α，在大腸桿菌BL21(DE3)中表達(dá)了豬α干擾素，此表達(dá)的產(chǎn)物為一融合蛋白。SDS-PAGE電泳后在26.5kD處出現(xiàn)了一條特異性的條帶，同預(yù)期結(jié)果基本一致。經(jīng)過(guò)IPTG誘導(dǎo)后，豬α干擾素的表達(dá)產(chǎn)量顯升高，表達(dá)量約占細(xì)菌總蛋白量的28％，純化后的豬α干擾素純化度在95％以上，可以用來(lái)抗病毒活性檢測(cè)試驗(yàn)。
　　二、豬α干擾素的活性測(cè)定
　　采用在Marc-145細(xì)胞上用細(xì)胞病變抑制法測(cè)定重組豬α干擾素的活性。結(jié)果表明:測(cè)得

3、重組豬α干擾素抗PRRSV的病毒活性為5.0×104U/mg。在細(xì)胞水平上重組豬α干擾素在體外對(duì)PRRSV起到有效的抑制作用，為進(jìn)一步應(yīng)用于動(dòng)物試驗(yàn)提供了參考。
　　三、干擾素與黃芪多糖量和用藥研究
　　利用Marc-145細(xì)胞體外培養(yǎng)，通過(guò)CPE和MTT法測(cè)定了黃芪多糖在Marc-145細(xì)胞上的最大無(wú)毒濃度，計(jì)算了半數(shù)抑制濃度。通過(guò)綜合評(píng)價(jià)黃芪多糖抗PRRSV效果和發(fā)展價(jià)值，發(fā)現(xiàn)黃芪多糖和重組豬α干擾素聯(lián)用對(duì)抗PRRSV具