IRF-7對(duì)草魚(yú)(Ctenopharyngodon idella)Ⅰ型干擾素轉(zhuǎn)錄的調(diào)控.pdf

1、干擾素(IFN)是一種具有抗病毒,抗腫瘤以及調(diào)節(jié)自身免疫等多種功能的糖蛋白。干擾素調(diào)節(jié)因子(IRF)因?qū)Ω蓴_素具有轉(zhuǎn)錄調(diào)控功能而得名。干擾素調(diào)節(jié)因子1、5、7在調(diào)控干擾素以及干擾素刺激基因(ISGs)轉(zhuǎn)錄方面扮演著重要作用。在哺乳類(lèi)動(dòng)物中有關(guān)IRF調(diào)控機(jī)理的研究已有很多,但在魚(yú)類(lèi)中有關(guān)他們研究還比較少。草魚(yú)是我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)魚(yú)種,本文主要研究了草魚(yú)IRF-7對(duì)Ⅰ型干擾素的調(diào)控機(jī)制。
　　 在實(shí)驗(yàn)室已克隆1個(gè)草魚(yú)Ⅰ型干擾素基因組及其

2、啟動(dòng)子序列的基礎(chǔ)上,我們對(duì)其序列特征進(jìn)行了分析,發(fā)現(xiàn)草魚(yú)Ⅰ型干擾素基因啟動(dòng)子包含啟動(dòng)子也包含一個(gè)典型的TATA box,4個(gè)IRF-E結(jié)合位點(diǎn),兩個(gè)NF-κB位點(diǎn)以及一個(gè)ATF-2/c-Jun結(jié)合位點(diǎn)。根據(jù)其啟動(dòng)子的結(jié)構(gòu)特征,我們克隆了含有不同結(jié)合位點(diǎn)的CiIFN啟動(dòng)子片段CiIFNP1-P9。同時(shí),在克隆草魚(yú)IRF-7的基礎(chǔ)上,分析了CiIRF-7在草魚(yú)肝,脾,腎中的表達(dá)水平,發(fā)現(xiàn)CiIRF-7經(jīng)poly I:C誘導(dǎo)之后表達(dá)水平上調(diào)。

3、并且通過(guò)原核表達(dá)系統(tǒng)獲得草魚(yú)IRF-7DBD結(jié)構(gòu)域蛋白。通過(guò)凝膠阻滯分析得出草魚(yú)IRF-7能夠在體外與IFN各個(gè)啟動(dòng)子片段結(jié)合,為證明它們對(duì)IFN的調(diào)控作用提供了可靠的證據(jù)。我們還利用共轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)技術(shù),將CiIRF-7和IFN啟動(dòng)子片段分別轉(zhuǎn)染至小鼠骨髓瘤細(xì)胞和草魚(yú)腎細(xì)胞,結(jié)果表明CiIRF-7能夠誘導(dǎo)上調(diào)CiIFN啟動(dòng)子,揭示了草魚(yú)IRF-7對(duì)Ⅰ型干擾素的正調(diào)控作用。
　　 本文同時(shí)檢測(cè)了CiIRF-1在草魚(yú)各組織的表達(dá)水平,結(jié)