口蹄疫疫苗保存技術(shù)研究.pdf

1、保護(hù)劑在動(dòng)物疫苗中具有重要的作用，直接影響疫苗的質(zhì)量。目前，動(dòng)物疫苗中，滅活疫苗占相當(dāng)大的比例，國(guó)內(nèi)外廣泛使用的口蹄疫（FMD）疫苗均系油乳劑滅活疫苗。國(guó)內(nèi)常用的保護(hù)劑主要為牛奶、蔗糖、明膠等，組方簡(jiǎn)單，保護(hù)功能差。加上國(guó)外對(duì)疫苗保護(hù)劑研究的保密，使成品疫苗的保存和運(yùn)輸受到一定限制。為延長(zhǎng)FMD疫苗的有效保護(hù)期，提高疫苗的免疫效力，本研究對(duì)FMD滅活疫苗保存技術(shù)進(jìn)行了初步探討。主要的研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下： 1．用三因素、三水平、雙

2、重復(fù)正交試驗(yàn)篩選出了對(duì)口蹄疫病毒（FMDV）抗原保護(hù)效果最好的4#保護(hù)劑配方，通過(guò)方差分析4#保護(hù)劑保存病毒在37℃靜置40hr和50hr測(cè)得TCID50極顯著的高于1、3、5、6、7、8號(hào)，顯著高于2、9。其中最主要的三種保護(hù)劑：海藻糖、山梨醇、PVP配方比例為8：5：4，保護(hù)劑與病毒配比為1：6時(shí)即可達(dá)到最佳保護(hù)效果。經(jīng)146s抗原含量測(cè)定，加4#保護(hù)劑的病毒分別于-20℃和4℃下保存150d，37℃下保存40hr，測(cè)得結(jié)果分別為1

3、．116μg/ml、0．896μg/ml、0．888μg/ml，進(jìn)一步驗(yàn)證了4#保護(hù)劑對(duì)病毒具有良好的保護(hù)效果。 2．將加入4#保護(hù)劑O/NX/99其細(xì)胞毒，在20℃放置30d后，使用RT-PCR擴(kuò)增和核苷酸序列分析技術(shù)，分析了VP1基因，并與未加保護(hù)劑的對(duì)照病毒進(jìn)行了比較，結(jié)果保護(hù)劑不會(huì)使病毒基因發(fā)生突變。 3．由于篩選的4#保護(hù)劑配方中主要組分海藻糖、山梨醇、PVP的含量會(huì)影響疫苗乳劑的穩(wěn)定性，本試驗(yàn)對(duì)該保護(hù)劑配方進(jìn)

4、行了優(yōu)化。通過(guò)對(duì)疫苗乳液的物理性狀評(píng)價(jià)，三種主要的保護(hù)劑海藻糖、山梨醇、PVP的含量對(duì)疫苗乳液的穩(wěn)定性都有極顯著的影響，PVP（聚乙烯吡咯烷酮）隨含量的增加疫苗乳液的穩(wěn)定性降低，海藻糖和山梨醇對(duì)疫苗乳液的穩(wěn)定性影響較小，通過(guò)正交試驗(yàn)和相關(guān)數(shù)據(jù)的分析，優(yōu)化后的復(fù)配比例為海藻糖：山梨醇：PVP=4：5：1。將優(yōu)化后的保護(hù)劑加入病毒抗原后配制疫苗，并將該疫苗在20℃下放置15d后，免疫豚鼠。經(jīng)微量細(xì)胞中和試驗(yàn)測(cè)定，豚鼠于免疫后14d、28d、